Напряженность иммунитета болезни ньюкасла

  

     ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂΠ                      
  ÑÅËÜÑÊÎÃÎ ÕÎÇßÉÑÒÂÀ
    È ÏÐÎÄÎÂÎËÜÑÒÂÈß                          ÓÒÂÅÐÆÄÀÞ
  ÐÎÑÑÈÉÑÊÎÉ ÔÅÄÅÐÀÖÈÈ                  Çàìåñòèòåëü íà÷àëüíèêà
 (Ìèíñåëüõîçïðîä Ðîññèè)               Äåïàðòàìåíòà âåòåðèíàðèè
                                               Â.Â.Ñåëèâåðñòîâ
 ÄÅÏÀÐÒÀÌÅÍÒ ÂÅÒÅÐÈÍÀÐÈÈ                      
      
 23 èþíÿ 1997 ã.    ¹ 988

   ÌÅÄÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÓÊÀÇÀÍÈß
 ïî îïðåäåëåíèþ óðîâíÿ àíòèòåë
 ê âèðóñó íüþêàñëñêîé áîëåçíè
 â ðåàêöèè òîðìîæåíèÿ ãåìàããëþ-
 òèíàöèè (ÐÒÃÀ)

                            1. ÎÁÙÈÅ ÏÎËÎÆÅÍÈß.

      1.1. Íàñòîÿùèå ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïðåäíàÿíà÷åíû äëÿ ñåðî-
 ëîãè÷åñêîãî êîíòðîëÿ íàïðÿæåííîñòè èììóíèòåòà ê íüþêàñëñêîé áî-
 ëåçíè (ÍÁ), îöåíêè ýôôåêòèâíîñòè èììóíèçàöèè, îïðåäåëåíèÿ îïòè-
 ìàëüíûõ ñðîêîâ âàêöèíàöèè (ðåâàêöèíàöèè) ïòèöû, à òàêæå äëÿ êîíò-
 ðîëÿ ýïèçîîòè÷åñêîé ñèòóàöèè ïî ÍÁ â õîçÿéñòâàõ.
      1.2. Ìåòîäèêà îñíîâàíà íà îáíàðóæåíèè â ñûâîðîòêå êðîâè ñïå-
 öèôè÷åñêèõ ê âèðóñó ÍÁ àíòèãåë (àíòèãåìàããëþòèíèíîâ) â ðåàêöèè
 òîðìîæåíèÿ ãåìàããëþòèíàöèè.
      1.3. Ñðîêè ñåðîëîãè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ ïîãîëîâüÿ îïðåäåëåíû
 Íàñòàâëåíèÿìè ïî ïðèìåíåíèþ âàêöèí ïðîòèâ ÍÁ è ìîãóò áûòü ñêîð-
 ðåêèòèðîâàíû, èñõîäÿ èç ýïèçîîòè÷åñêîé ñèòóàöèè â êîíêðåòíîì õî-
 çÿéñòâå.
      1.4. Èññëåäîâàíèþ ïîäëåæàò íå ìåíåå 25 ïðîá ñûâîðîòîê êðîâè
 îò ïòèö, âçÿòûõ èç ðàçëè÷íûõ ìåñò ïòè÷íèêà (çàëà) â îáúåìå íå ìå-
 íåå 0,5 ñì(3).
      1.5. Ðåçóëüòàòû êàæäîãî ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ äîëæíû
 áûòü çàðåãèñòðèðîâàíû â ñïåöèàëüíîì æóðíàëå è ïðîàíàëèçèðîâàíû
 âåòåðèíàðíûì âðà÷îì õîçÿéñòâà.

        2. Ìåòîäèêà ïîñòàíîâêè ðåàêöèè òîðìîæåíèÿ ãåìàããëþòèíàöèè
      
      2.1. Îáîðóäîâàíèå è ðåàêòèâû:
      — àíòèãåí ñóõîé âèðóñâàêöèíû ïðîòèâ ÍÁ èç øòàììîâ «Ëà-Ñî-
 òà», «Â1» èëè «ÃÀÌ-61» èëè ýêñòðàýìáðèîíàëüíàÿ æèäêîñòü êóðèíûõ
 ýìáðèîíîâ, èõôèöèðîâàííûõ ýòèìè øòàììàìè, ñ ãåìàããëþòèíèðóþùèì
 òèòðîì íå íèæå 1:8;
      — èñïûòóåìûå ñûâîðîòêè ïòèö;
      — Î,7- èëè 1%-íàÿ âçâåñü ýðèòðîöèòîâ ïåòóõà íà ôèçèîëîãè÷åñ-
 êîì èëè ôîñôàòíî-áóôåðíîì ðàñòâîðå (ðÍ 7,2-7,4) äëÿ èññëåäîâàíèé â
 ìèêðî- è ìàêðîâàðèàíòå ñîîòâåòñòâåííî;
      — ïèïåòêè ìåðíûå;
      — ìèêðîòèòðàòîðû îäíî- è âîñüìèêàíàëüíûå ëèáîé ìîäåëè ñ âàðüè-
 ðóåìûì èëè ñòàáèëüíûì îáúåìîì â ïðåäåëàõ 0,025-0,05 ñì(3);
      2.2. Ïîäãîòîâêà àíòèãåíà.
      2.2.1. Âàêöèíó â àìïóëàõ (ôëàêîíàõ) ðåñóïåíäèðóþò â ôèçèî-
 ëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå äî èñõîäíîãî îáúåìà âèðóñà.
      2.3. Ïðèãîòîâëåíèå âçâåñè àðèòðîöèòîâ ïåòóõà.
      Êðîâü áåðóò èç ïîäêðûëüöîâîé âåíû âî ôëàêîíû ñ 2-Ç%-íûì
 ðàñòîâîðîì ëèìîííî-êèñëîãî íàòðèÿ íà ôçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå (pH
 7,2-7,4) â ñîîòíîøåíèè 1:2 , òðèæäû îòìûâàþò ôèçèîëîãè÷åñêèì
 ðàñòâîðîì ïóòåì öåíòðèôóãèðîâàíèÿ ïðè 1500 îá/ìèí 10 ìèí. Èç
 îñàäêà ýðèòðîöèòîâ íà ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå (ðÍ 7,2-7,4) ãîòî-
 âÿò 0,7-èëè 1%-íóþ ñóñïåíçèþ. Õðàíèòü ñóñïåíçèþ ìîæíî â óñëîâèÿõ
 õîëîäèëüíèêà (+4*Ñ) äî ïîÿâëåíèÿ ïðèçíàêîâ ãåìîëèçà ýðèòðîöèòîâ.
      Êðîìå íàòèâíûõ â ðàáîòå ìîãóò áûòü èñëîëüçîâàíû ñòàáèëèçèðî-
 âàííûå (ôîðìàëèíèçèðîâàííûå) ýðèòðîöèòû ïåòóõà.
      2.4. Ïîëó÷åíèå ñûâîðîòêè êðîâè.
      2.4.1. Êðîâü áåðóò èç ïîäêðûëüöîâîé âåíû èëè ïóòåì ñêàðèôè-
 êàöèè ãðåáíÿ, ñîáèðàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè, ïðåäâàðèòåëüíî óâ-
 ëàæíåííûå ñòåðèëüíûì ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì. Îáðàçîâàâøèéñÿ
 ñãóñòîê îòäåëÿþò îò ñòåíîê òîíêèì ìåòàëëè÷åñêèì ñòåðæíåì èëè ïàñ-
 òåðîâñêîé ïèïåòêîé è âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå 
 (18-20*Ñ) â òå÷åíèå 12-18 ÷ èëè ïðè òåìêðàòóðå 37*Ñ (òåðìîñòàò) â
 òå÷åíèå 60 ìèí, à çàòåì 8-10 ÷ ïðè +4*Ñ (õîëîäèëüíèê). Îòñòîÿâøó-
 þñÿ ñûâîðîòêó ñëèâàþò â ÷èñòûå ïðîáèðêè è èññëåäóþò â ÐÒÃÀ.
      Äëÿ óäàëåíèÿ òåðìîëàáèëüíûõ èíãèáèòîðîâ ñûâîðîòêó êðîâè
 ïðîãðåâàþò â âîäÿíîé áàíå ïðè 56*Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. 
      2.5. Ðåàêöèþ òîðìîæåíèÿ ãåìàããëþòèíàöèè ïðîâîäÿò â äâà ýòàïà:
      — îïðåäåëåíèå ãåìàããëþòèíèðóþùåãî òèòðà âèðóñà â ðåàêöèè ãå-
 ìàããëþòèíàöèè (ÐÃÀ) äëÿ ðàñ÷åòà  ðàáî÷åé äîçû;
      — îïðåäåëåíèå òèòðà àíòèòåë â ïðîáàõ ñûâîðîòêè êðîâè.
      Ðåàêöèþ ñòàâÿò ìàêðî- èëè ìèêðîìåòîäîì.
      2.5.1. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè.
      Äëÿ ïîñòàíîâêè ÐÃÀ ãîòîâÿò äâóêðàòíûå ðàçâåäåíèÿ âàêöèííîãî
 âèðóñà îò 1:2 äî 1:4096. Ñ ýòîé öåëüþ âî âñå ëóíêè îäíîãî ðÿäà
 ïîëèñòåðîëîâîé ìèêðîïàíåëè ìèêðîòèòðàòîðîì ðàçëèâàþò ôèçèîëîãè-
 ÷åñêèé ðàñòâîð (0,05 èëè Î,25 ñì3), â ïåðâóþ âíîñÿò â ðàâíîì
 îáúåìå âàêöèííûé âèðóñ òðåõêðàòíî ïèïåòèðóþòè è ïåðåíîñÿò 0,05 èëè
 0,025 ñì3 âî âòîðóþ ëóíêó è ò.ä. Èç ïîñëåäíåé ëóíêè 0,05 èëè
 0,025 ñì3 óäàëÿþòè îáåçâðåæèâàþò â 2%-íîì ðàñòâîðå åäêîãî íàòðèÿ.
      Ïîñëå ðàçâåäåíèÿ âèðóñà âî âñå ëóíêè âíîñÿò 0,7%-íóþ ñóñïåí-
 çèþ ýðèòðîöèòîâ ïåòóõà â îáúåìå, ðàâíîì èñõîäíîìó îáúåìó ôèçèîëî-
 ãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Ìèêðîïàíåëè àêêóðàòíî âñòðÿõèâàþò è îñòàâëÿþò
 ïðè êîìàíàòíîé òåìïåðàòóðå (18-20*Ñ). Ó÷åò ðåàêöèè ïðîâîäÿò ïîñëå
 îñåäàíèÿ ýðèòðîöèòîâ â êîíòðîëå.
      Äëÿ êîíòðîëÿ ýðèòðîöèòîâ íà ñïîíòàííóþ ãåìàããëþòèíàöèþ îï-
 ðåäåëåíèÿ âðåìåíè ó÷åòà ðåàêöèè â äâå ëóíêè ñ ôèçèîëîãè÷åñêèì
 ðàñòâîðàì (0,05 èëè 0,025 ñì3) äîáàâëÿþò ðàâíûé îáúåì ýðèòðîöèòîâ.
      ÐÃÀ îöåíèâàþò ïîëîæèòåëüíî ïðè îcåäàíèè ýðèòðîöèòîâ â âèäå
 õîðîøî âûðàæåííîãî «çîíòèêà», îòðèöàòåëüíî — â âèäå «ïóãîâêè». Çà
 òèòð âèðóñà ïðèíèìàþò åãî íàèáîëüøåå ðàçâåäåíèå, äàþùåå ÷åòêî âû-
 ðàæåííóþ àããëþòèíàöèþ â âèäå «çîíòèêà». Ïîëó÷åíèå íå÷åòêèõ ðå-
 çóëüòàòîâ ìîæåò áûòü ñâÿçàíî ñ èçìåíèâøèìñÿ ðÍ ôèçèîëîãè÷åñêîãî
 ðàñòâîðà.
      Ðåàêöèÿ ìîæåò áûòü ïîñòàâëåíà ìàêðîìåòîäîì â ïîëèñòåðîëîâûõ
 ìàêðîïàíåëÿõ, äëÿ ÷åãî âñå êîìïàíåíòû áåðóò â îáúìå 0,2 ñì3. Ïðè
 ýòîì â ðàáîòå èñïîëüçóþò 1%-íóþ ñóñïåíçèþ ýðèòðîöèòîâ ïåòóõà.
      2.5.2. Äëÿ ïîñòàíîâêè ÐÒÃÀ ãîòîâÿò ðàáî÷óþ äîçó èññëåäóåìîãî
 âèðóñà (4ÃÀÅ), èñõîäÿ èç åãî òèòðà.
      Äëÿ ýòîãî èñõîäíûé âèðóñ ðàçâîäÿò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì
 âî ñòîëüêî ðàç, ñêîëüêî ïîëó÷àþò îò äåëåíèÿ åãî òèòðà íà 4.
      Íàïðèìåð: òèòð âèðóñà 1:256. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàáî÷åãî ðàç-
 âåäåíèÿ íåîáõîäèìî âçÿòü 63 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà è 1 ñì3
 èñõîäíîãî âèðóñà (256:4=64).
      Îáúåì ðàáî÷åé äîçû âèðóñà îïðåäåëÿþò, èñõîäÿ èç êîëè÷åñòâà
 ïîäëåæàùèõ èññëåäîâàíèþ ñûâîðîòîê. Äëÿ ïîñòàíîâêè ÐÒÃÀ ìèêðîìåòî-
 äîì íà èññëåäîâàíèå 1 ñûâîðîòêè òðåáóåòñÿ 0,6 èëè 0,3 ñì3  4 ÃÀÅ
 âèðóñà (â çàâèñèìîñòè îò ïåðâîíà÷àëüíîãî îáúìà ôèçèîëîãè÷åñêîãî
 ðàñòâîðà), ìàêðîìåòîäîì — 2,4 ñì3.
      2.5.3. Ðàáî÷óþ äîçó âèðóñà ãîòîâÿò íåïîñðåäñòâåííî â äåíü
 ïîñòàíîâêè ðåàêöèè ñ îáÿçàòåëüíûì êîíòðîëåì 4 ÃÀÅ.
      Äëÿ ýòîãî â 4 ëóíêè ðàçëèâàþò ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð â îáú-
 åìàõ, âûáðàííûõ äëÿ ïîñòàíîâêè ðåàêöèè. Â ïåðâóþ äîáàâëÿþò ðàâíûé
 îáúåì ðàáî÷åé äîçû âèðóñà è òèòðóþò ñîãëàñíî ï. 2.5.1.
      Ó÷åò ðåàêöèè ïðîâîäÿò ïîñëå îñåäàíèÿ çðèòðîöèòîâ â êîíòðîëå.
      Ïðè ïðàâèëüíîì îïðåäåëåíèè ðàáî÷åé äîçû â ïåðâîé, âòîðîé
 ëóíêàõ äîëæíà áûòü ïîëíàÿ àããëþòèíàöèÿ («çîíòèê»), â òðåòüåé —
 ÷àñòè÷íàÿ, â ÷åòâåðòîé — îòñóòñòâèå àããëþòèíàöèè («ïóãîâêà»).
 Ïîëíàÿ àããëþòèíàöèÿ â òðåòüåé ëóíêå îçíà÷àåò, ÷òî äîçà âèðóñà çà-
 âûøåíà, à îòñóòñòâèå àããëþòèíàöèè â ïåðâîé èëè âî âòîðîé ëóíêàõ —
 ñâèäåòåëüñòâóåò î íåäîñòàòî÷íîì åãî êîëè÷åñòâå. Êîððåêòèðîâàíèå
 ðàáî÷åé äîçû (óâåëè÷åíèå èëè óìåíüøåíèå) ïðîâîäÿò äîáàâëåíèåì âè-
 ðóñà èëè ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà ñ îáÿçàòåëüíûì ïîâòîðíûì êîíò-
 ðîëåì 4 ÃÀÅ.
      2.6. Ïîñòàíîâêà ÐÒÃÀ.
      2.6.1. Äëÿ ïîñòàíîâêè ðåàêöèè âî âñå ëóíêè ïîëèñòåðîëîâîé
 ìèêðî- èëè ìàêðîïàíåëè âíîñÿò ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð â îáúåìå
 0,05 (Î,025) èëè 0,2 ñì3. Çàòåì â ïåðâóþ ëóíêó äîáàâëÿþò ðàâíûé
 îáúåì èñïûòóåìîé ñûâîðîòêè, òðèæäû ïèïåòèðóþò è ãîòîâÿò ðÿä ïîñ-
 ëåäîâàòåëüíûõ äâóêðàòíûõ ðàçäåëåíèé (ñ 1:2 äî 1:4096).
      Ïîñëå ýòîãî, âî âñå ëóíêè âíîñÿò ðàáî÷åå ðàçâåäåíèå âèðóñà â
 îáúåìå 0,05 (0,025) ìàè 0,2 ñì3, îñòîðîæíî âñòðÿõèâàþò è ïîñëå
 25-30 ìèí êîíòàêòà ñûâîðîòêè ñ âèðóñîì â êàæäóþ ëóíêó äîáàâëÿþò
 äâîéíîé îáúåì (ïî îòíîøåíèþ ê îáúåìó ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà)
 ñóñïåíçèè ýðèòðîöèòîâ.
      2.6.2. Êîíòðîëè:
      — ñûâîðîòêè íà èçîàããþòèíàöèþ (ñûâîðîòêà + ôèçèîëîãè÷åñêèé
 ðàñòâîð â ðàâíûõ îáúåìàõ + 1%-íàÿ ñóñïåíçèÿ ýðèòðîöèòîâ â äâîéíîì
 îáúåìå). Àããëþòèíàöèÿ äîëæíà îòñóòñòâîâàòü;
      — ýðèòðîöèòîâ íà ñïîíòàííóþ àããëþòèíàöèþ (ñóñïåíçèÿ ýðèòðî-
 öèòû + ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð â ðàâíûõ îáúåìàõ). Àããëþòèíàöèÿ
 äîëæíà îòñóòñòâîâàòü.
      2.6.3. Ðåàêöèþ ó÷èòûâàþò ÷åðåç 25-40 ìèí. Ïðè íàëè÷èè â ñû-
 âîðîòêå àíòèòåë íàáëþäàþò òîðìîæåíèå ãåìàããëþòèíàöèè — ýðèòðî-
 öèòû âûïàäàþò â îñàäîê â âèäå «ïóãîâêè».
      Òèòðîì ñûâîðîòêè ñ÷èòàþò íàèáîëüøåå åå ðàçâåäåíèå, äàþùåå
 ïîëíîå òîðìîæåíèå ãåìàããëþòèíàöèè 4 ÃÀÅ âèðóñà ÍÁ.
      2.7. Èíòåðïðèòàöèÿ ïîëó÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ.
      2.7.1. Ïî ðåçóëüòàòàì ÐÒÃÀ îïðåäåëÿþò ýôôåêòèâíîñòü èììóíè-
 çàöèè â ïàðòèè ïðèâèòûõ öûïëÿò ïóòåì äåëåíèÿ ñóììàðíîãî êîëè÷åñò-
 âà ïðîá ñ òèòðîì àíòèòåë 1:8 è âûøå (ïîñëå ïðèìåíåíèÿ æèâûõ âàê-
 öèí) èëè 1:16 è âûøå (ïîñëå ïðèìåíåíèÿ èíàêòèâèðîâàííûõ âàêöèí)
 íà îáùåå ÷èñëî èññëåäîâàííûõ ñûâîðîòîê è âûðàæàþò â ïðîöåíòàõ.
      2.7.2. Ïòèöó ñ÷èòàþò íåâîñïðèèì÷èâîé ê ÍÁ ïðè ýôôåêòèâíîñòè
 èììóíèçàöèè 80 è áîëåå ïðîöåíòîâ ïîñëå ïðèìåíåíèÿ æèâûõ âèðóñâàê-
 öèí è 90 è áîëåå ïðîöåíòîâ ïîñëå èñïîëüçîâàíèÿ èíàêòèâèðîâàííûõ
 ïðåïàðàòîâ.
      2.7.3. Ïðè ýôôåêòèâíîñòè èììóíèçàöèè ìåíåå 80% ïîñëå ïðèìå-
 íåíèÿ æèâûõ âèðóñâàêöèí èëè ìåíåå 90% ïîñëå ïðèìåíåíèÿ èíàêòèâè-
 ðîâàííûõ âèðóñâàêöèí ïòèöà ïîäëåæèò ïîâòîðíîé âàêöèíàöèè.
      2.7.4. Îáíàðóæåíèå â ÐÒÃÀ âûñîêîãî óðîâíÿ àíòèòåë (1:2048 è
 âûøå ó ïòèö, ïðèâèòûõ æèâûìè âàêöèíàìè, è 1:4096 è âûøå ó ïòèö,
 ïðèâèòûõ èíàêòèâèðîâàííûìè âàêöèíàìè) ñâèäåòåëüñòâóåò î âîçìîæíîé
 öèðêóëÿöèè â ñòàäå ïîëåâîãî âèðóñà íüþêàñëñêîé áîëåçíè. Â òàêèõ
 ñëó÷àÿõ ÷åðåç 21-ÇÎ äíåé ïðîâîäÿò ïîâòîðíîå èññëåäîâàíèå ïðîá ñû-
 âîðîòîê êðîâè, ïîëó÷åííûõ îò ýòèõ æå ïòèö.
      2.7.5. Ñíèæåíèå èëè ñòàáèëèçàöèÿ óðîâíÿ àíòèòåë è (èëè)
 óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà ïòèö ñ âûñîêèì óðîâíåì àíòèòåë ïðè ïîâòîð-
 íûõ èññëåäîâàíèÿõ ïðîá ñûâîðîòêè êðîâè ñâèäåòåëüòâóåò îá îòñóòñ-
 òâèè öèðêóëÿöèè â õîçÿéñòâå ýïèçîîòè÷åñêîãî âèðóñà è ÿâëÿåòñÿ
 ñëåäñòâèåì ïîñòâàêöèíàëüíûõ ðåàêöèé.
      2.7.6. Íàðàñòàíèå òèòðîâ è (èëè) óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ïòèö ñ
 âûñîêèì óðîâíåì àíòèòåë ïðè îòñóòñòâèè êëèíè÷åñêèõ è ïàòîëîãîàíà-
 òîìè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ ÍÁ íå ÿâëÿåòñÿ îñíîâàíèåì äëÿ îáúÿâëåíèÿ õî-
 çÿéñòâà íåáëàãîïîëó÷íûì ïî äàííîìó çàáîëåâàíèþ, íî ïðåäóñìàòðèâàåò 
 óñòàíîâëåíèå çà ïòèöåé òùàòåëüíîãî íàáëþäåíèÿ, ïðîâåäåíèÿ ñèñòåìà-
 òè÷åñêèõ ñåðîëîãè÷åñêèõ è âèðóñîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé.
      2.7.7. Íàðàñòàíèå òèòðîâ è (èëè) óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà ïòèö ñ     
 âûñîêèì óðîâíåì àíòèòåë ïðè íàëè÷èè êëèíèêîïàòîëîãîàíàòîìè÷åñêèõ
 ïðèçíàêîâ çàáîëåâàíèÿ ñëóæèò îñíîâàíèåì äëÿ ïðîâåäåíèÿ äåòàëüíîãî
 ýïèçîòîëîãè÷åñêîãî îáñëåäîâàíèÿ õîçÿéñòâà è óñòàíîâëåíèå îêîí÷à-
 òåëüíîãî äèàãíîçà ïî äàííîìó çàáîëåâàíèþ.     
      2.7.8. Îáíàðóæåíèå àíòèòåë ê âèðóñó íüþêàñëñêîé áîëåçíè ó
 ïòèö, íå ïðèâèòûõ ïðîòèâ ÍÁ áåç êëèíè÷åñêèõ è ïàòîëîàíàòîìè÷åñêèõ
 ïðèçíàêîâ çàáîëåâàíèÿ ñâèäåòåëüñòâóåò î öèðêóëÿöèè ïîëåâûõ ëåíòî-
 ãåííûõ øòàìîâ âèðóñà íüþêàñëñêîé áîëåçíè è íå ÿâëÿåòñÿ îñíîâàíèåì     
 äëÿ îáúÿâëåíèÿ õîçÿéñòâà íåáëàãîïîëó÷íûì ïî ÍÁ. Çà ïòèöåé òàêèõ
 õîçÿéñòâ óñòàíàâëèâàþò ïîñòîÿííîå íàáëþäåíèå.
      
      Ñ óòâåðæäåíèåì íàñòîÿùèõ Ìåòîäè÷åñêèõ óêàçàíèé íà òåððèòîðèè
 Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè îòìåíÿþòñÿ Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïî ñåðîëîãè-
 ÷åñêîìó êîíòðîëþ íàïðÿæåííîñòè èììóíèòåòà ïðè íüþêàñëñêîé áîëåçíè
 ïòèö ñ ïîìîùüþ ðåàêöèè çàäåðæêè ãåìàããëþòèíàöèè N115-6à îò 18.05.79ã.    
 
      Ìåòîäè÷åñêèå óêàçàíèÿ ïî îïðåäåëåíèþ óðîâíÿ àíòèòåë ê âèðóñó
 íüþêàñëñêîé áîëåçíè â ðåàêöèè òîðîìîæåíèÿ ãåìàããëþòèíàöèè ðàçðàáî-
 òàíû ñîòðóäíèêàìè ëàáîðàòîðèè ïðåïàðàòîâ. ïðèìåíÿåìûõ â ïòèöåâîäñò-
 âå Âñåðîññèéñêîãî Ãîñóäàðñòâåííîãî íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîãî èíñòè-
 òóòà êîíòðîëÿ. ñòàíäàðòèçàöèè è ñåðòèôèêàöèè âåòåðèíàðíûõ ïðåïàðàòîâ.

Читайте также:  Проверить иммунитет по крови что сдавать

Источник

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ПРОМЫШЛЕННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА

Н.В. САДОВНИКОВ (фото),

доктор ветеринарных наук, профессор, Уральская ГСХА Р.Б. КОНДРАТЬЕВ,

кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник отдела инфекционной патологии животных,

Уральский НИВИ РАСХН

Ключевые слова: иммуногенность, вакцина, болезнь Ньюкасла, вакцинация, промышленное птицеводство, напряжённость иммунитета.

В настоящее время в мире производится и используется достаточно большое количество вакцин для профилактики болезни Ньюкасла, поэтому выбор вакцины, имеющей высокую иммуногенную активность при низкой реактогенности, представляет актуальную проблему для промышленного птицеводства.

В то же время важной является оценка влияния живых вирусных вакцин на организм продуктивной птицы, так как вакцинация проводится на очень большой популяции промышленной птицы (500 тыс. — 1 млн голов).

И в теоретическом плане почти всегда применение (введение) генетически чужеродного материала в организм будет отражаться изменением реактивности и резистентности птицы промышленных кроссов в сторону

620075, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42; тел. З (343) 371-03-91

увеличения энергетических затрат организма на распознавание антигена и включение защитных механизмов, направленных на нейтрализацию хотя и вакцинного аттенуированного антигена. Выражение этих изменений начинается с пускового момента (места попадания в организм антигена и его количества при проведённой вакцинации) и далее формированием ответной реакции в виде симптомов и изменений структур тканей, особенно тех, которые запускают реакции воспаления (защиты). Как бы ни была качественно приготовлена вакцина и хорошо выполнена вакцинация, последствия её для популяции в целом будут проявляться патологическими процессами в тканях на месте попадания антигена и генерализованной формой ответной реакции на вакцинный анти-

620142, г. Екатеринбург, ул. Белинского 112а; тел. З (343) 257-64-З2; e-mail: kondratevrb@yandex.ru

ген иммуннои и неироэндокриннои системы организма, которая и будет выражаться в виде поствакцинальноИ болезни.

Читайте также:  Сиропы для повышения иммунитета

Таким образом, комплекс изменении, возникающих при попадании вакцинного антигена на ткани, может представлять собоИ метод биологической оценки качества вакцины, попадающей в организм, и будет выражаться в модификации морфофункциональноИ активности тканеИ: регенерации, неоан-гиогенезе и изменении состояния тучных клеток.

Immunogenicity, vaccine, illness of Newcastle, vaccination, industrial poultry farming, the intensity of immunity.

Задачи исследования

1. Изучить морфофункциональное состояние органов у клинически здоровых цыплят разных возрастных групп.

2. Оценить функциональную активность тучных клеток в различных органах, её изменение с возрастом.

3. Оценить биологические свойства вакцины против ньюкаслской болезни из штамма Ла-Сота:

1) реактогенность вакцины для бройлеров различного возраста;

2) степень индукции у вакцины на тучные клетки в иммунных органах через 7 суток после её введения в организм.

Вакцину из штамма Ла-Сота (технология разработки ФГУ «ВНИИЗЖ») применяли с профилактической целью интраназально цыплятам в возрасте 11 суток.

Иммунитет против ньюкаслской болезни наступает через 7-8 суток после вакцинации.

У цыплят опытной группы после вакцинации в возрасте 19 суток в селезёнке появляется отёчность тканей, пери-васкулярное кровоизлияние, застойная гиперемия сосудов.

В печени наблюдается активация лимфоидных фолликулов. В системе триады печени обнаруживается полиморфноклеточная инфильтрация.

В поджелудочной железе отмечается гиперемия лимфоциркуляторного русла, разрастание периваскуляр-ной соединительной ткани, тромбы в крупных сосудах.

В двенадцатиперстной кишке на слизистой оболочке наблюдается воспаление катарального характера, гиперплазия бокаловидных клеток, деск-вамация эпителия.

Функциональные изменения в тучных клетках в тех же органах имели разнообразный характер.

Учитывая, что тучные клетки рассматриваются как регуляторы тканевого гомеостаза малого радиуса действия, эти функции реализуются благодаря продуцированию ими ряда биологических факторов, которые можно подразделить на группы.

Вещества второй группы накапливаются в период сенсибилизации и выделяются при взаимодействии с тучными клетками антигенов, которые и могут

вызывать в соответствующей ткани воспалительные реакции различной интенсивности (альтернативные изменения, сосудистые реакции, активность хемотаксиса и формирование воспалительного экссудата).

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Так, в селезёнке наблюдалось увеличение количества тучных клеток на 21,4±2,3%. В печени на 17,6±1,4% увеличилось количество тканевых базофи-лов. В поджелудочной железе на 7,4±1,3% и в двенадцатиперстной кишке на 8,4±2,4% количество тучных клеток выросло по сравнению с таковыми показателями у цыплят, взятых из ин-тактной группы.

В процессе дегрануляции тучных клеток после воздействия вакцинного антигена вначале наблюдали вытеснение вирусных и зрелых гранул, которые располагались на периферии клеток, затем подвергались дегрануляции малодифференцированные гранулы, располагающиеся внутри клеток. Процессу дегрануляции тучных клеток предшествовали ультраструктурные перестройки внутри клеток в зависимости от вида секреции БАВ и органной дислокации тучных клеток.

По результатам проведённых наблюдений можно отметить, что интрана-зальное введение вакцины штамма Ла-Сота существенно изменяет состояние функции (по реакции тучных клеток) и морфологическое состояние органов у цыплят на 8-9-е сутки после применения вакцины.

Функциональные изменения тучных клеток могут существенно модифицировать структуру ткани с формированием в соответствующих тканях воспаления и разнообразной степенью выраженности различных стадий воспалительной реакции.

Всё это указывает, по нашим представлениям, на высокую иммуноген-ность и реактогенность использованной вакцины. И есть предположение, что вакцина данной серии реактогенна.

Иммуногенность промышленных вакцин против болезни Ньюкасла изучали на 7 птицепредприятиях Свердловской области, из них 2 предприятия специализируются на выращивании племенной птицы, 4 — бройлеров, 1 — яичного направления. На этих птицефабриках

Читайте также:  Вирус эпштейн барра снижает иммунитет

Ветеринария

применяют следующие вакцины.

■ Живая сухая вакцина AviNova ND LASOTA производства компании AviNova (Германия). Одна доза живой вакцины AviNova ND LASOTA содержит не менее 1 060 ЭИД50 вируса НБ (штамм Ла-Сота). Вакцину применяют с профилактической целью для активной иммунизации цыплят прародительского, родительского и товарного стада против ньюкаслской болезни [1].

■ Нобилис ND Клон 30 (Нидерланды, Intervet International B.V.). Сухая живая вакцина против ньюкаслской болезни птиц. Для активной иммунизации цыплят против ньюкаслской болезни. Каждая доза вакцины содержит не менее 1060 ЭИД50 вируса ньюкаслской болезни (штамм Кпон 30) [2].

■ Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни птиц из штамма Бор-74 ВГНКИ (Щёлковский биокомбинат, Покровский завод биопрепаратов). Сухая вакцина изготавливается из вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости куриных эмбрионов, заражённых вакцинным штаммом Бор-74 ВГНКИ вируса ньюкаслской болезни, подвергнутой лиофильному высушиванию в защитной среде. Вакцина предназначена для профилактики ньюкаслской болезни. Способствует формированию активного иммунитета к возбудителю ньюкаслской болезни птиц. Вызывает выработку специфических антител [3].

■ Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни птиц из штамма Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир). Изготовлена из вируссодержащей экстраэмбриональной жидкости куриных эмбрионов. Применяют с профилактической целью в благополучных и неблагополучных хозяйствах по ньюкаслской болезни [4].

В 2009 году согласно утверждённой для каждой птицефабрики программе вакцинации птицепоголовья на птицепредприятиях Свердловской области проводилась вакцинопрофилактика против болезни Ньюкасла. Местный (клеточный) иммунитет формируется в течение 7 суток, гуморальный иммунитет — в течение 21 дня. Продолжительность иммунитета составляет от нескольких недель до нескольких месяцев и зависит от количества предварительных вакцинаций, кратность которых определяется исследованиями сыворотки крови на наличие специфических антител (РТГА или ИФА). Срок вакцинации определяют по уровню антител в РТГА или в ИФА. Птицу прививают, если в 20 и более процентах проб сывороток крови титр антигемагглютининов ниже 1:8 или в ИФА менее 2-кратного минимального положительного показателя, предусмотренного в наставлении по применению конкретного диагностикума. Срок ревакцинации зависит от последующих серологических исследований через каждые 14-28 дней после вакцинации [1].

По результатам полученных с птицефабрик данных (ИФА и РТГА) было

Таблица

Напряжённость поствакцинального иммунитета к вирусу НБ

Номер Производство Вакцина Напряжённость иммунитета

1 племенное живая АуіИоуа N0 І-АвОТА, (АуіИоуа, Германия) S6%

2 бройлерное живая Нобилис N0 Клон 30 (Нидерланды) S6%

З яичное живая Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир). 1GG%

4 племенное живая Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир) 1GG%

5 бройлерное живая Бор-74 (ВГНКИ) 91%

6 бройлерное живая Бор-74 (ВГНКИ) 91%

7 бройлерное живая Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир) 91%

Ветеринария

установлено, что напряжённость иммунитета против болезни Ньюкасла на птицефабриках составляет (табл.)

При детальном анализе результатов серологических исследований сывороток крови видно, что на всех предприятиях у птицепоголовья сформирован достаточно высокий иммунитет к вирусу болезни Ньюкасла. Наиболее низкие показатели напряжённости иммунитета были у вакцин из штамма ЬДБОТД АуИМоуа и из штамма Клон 30 Нобилис Ый (86%), но напряжённость поствакци-нального иммунитета была выше (80%), что означает, что эти вакцины обладают способностью вызывать специфический иммунный ответ с развитием иммунитета к вирусу болезни Ньюкасла.

Стопроцентный результат показала вакцина из штамма Ла Сота производства ВНИИЗЖ (г. Владимир). Однако после применения владимирской вакци-

ны у цыплят увеличивается нагрузка на иммунные органы, примерно на неделю снижается рост цыплят, происходит формирование ответной реакции в виде симптомов и изменений структур тканей, особенно тех, которые запускают реакции воспаления (защиты). Так, в селезёнке наблюдалось увеличение количества тучных клеток на 21,4±2,3%. В печени на 17,6±1,4% увеличилось количество тканевых базофилов. В поджелудочной железе на 7,4±1,3% и в двенадцатиперстной кишке на 8,4±2,4% количество тучных клеток выросло по сравнению с таковыми показателями у цыплят, взятых из интактной группы.

Импортные вакцины АуИМоуа Ый ЬАБОТА (Германия) и Нобилис Ый Клон 30 (Нидерланды) в отличие от отечественных содержат мягкий штамм с тропизмом к респираторной системе, обладают способностью вызывать устойчи-

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

вый иммунитет к вирусу болезни Ньюкасла при низкой реактогенности, после их применения индуцируется местный иммунитет в респираторной системе без проявления нежелательных по-ствакцинальных реакций, тогда как отечественные вакцины Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир) и Бор-74 ВГНКИ обладают высокой иммуногенно-стью и реактогенностью.

Таким образом, максимального эффекта вакцинации против болезни Ньюкасла можно достичь при применении вакцин Нобилис Ый Клон 30 (Голландия) или АуИМоуа Ый ЬАБОТА (Германия) в комплексе с вакциной Ла-Сота (ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир) вследствие снижения реактогенности и повышения иммуногенности. Полученный таким образом иммунитет является самым полным и стойким к воздействию полевых штаммов болезни Ньюкасла.

Литература

1. Вакцины для птиц. AviNova ND LASOTA // Большая ветеринарная энциклопедия. URL: https://www.webvet.ru/ equipment.asp?e_id=1977.

2. Poultry focus. Business news for the poultry industry : инф. бюлл. Вып. 1. Август 2007.

3. Вакцины, диагностикумы и химпрепараты. Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни птиц из шт. Бор-74 ВГНКИ // Биопром-Центр. URL: https://bioprom-td.ru/catalog/detail.php?ID=2767.

4. Ветеринарные препараты. Вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни птиц из шт. Ла-Сота // Ветеринар.ру. URL: https://www.veterinar.ru/pharmacy/91/567.

Источник