Напряженность иммунитета у птиц
Ньюкаслская болезнь (псевдочума) птиц — остро протекающее и быстро распространяющееся вирусное заболевание, характеризующееся поражением органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы, вызывающий массовый падеж птицы.
У вакцинированной птицы с ослабленным иммунитетом болезнь может протекать без ярко выраженных клинических и патологоанатомических признаков.
Историческая справка. Большие вспышки псевдочумы были зарегистрированы в 1926г. на острове Ява и в Англии (г. Ньюкасл). Поэтому псевдочуму часто называют азиатской чумой, или ньюкасловской болезнью.
В СССР эпизоотии псевдочумы птиц возникали в 1941—1945гг. П.Н Свинцов в соавторстве с А.Я. Фоминой и С.И.Агаповым изготовили формолгидроокисьалюминевую эмбрионвакцину.
Экономический ущерб значительный. При остром течении болезни погибает 60-90% заболевшей птицы. При возникновении эпизоотии большие затраты на проведение карантинных и профилактических мероприятий. Особенно высокая стоимость прививок при индивидуальном способе введения вакцины в ЛПХ и КФХ граждан.
Возбудитель болезни — РНК-содержащий вирус, относящийся к группе парамиксовирусов. Его величина 80-125нµ. Вирусная частица в водной среде при электронно-микроскопическом исследовании имеет округлую форму, она проходит через фильтры Зейтца (СФ, ЕК), Беркефельда, обладает гемагглютинирующими свойствами по отношению к эритроцитам голубей, кур, индеек, лягушек, морских свинок, баранов, кошек.
Вирус чувствителен к эфиру и хлороформу, нагреванию и рН среды, равной 3. Устойчивость вируса псевдочумы к действию физических и химических факторов зависит от белковой среды, в которой находится вирусная частица, и от рН среды. Солнечные лучи инактивируют вирус за 2 суток, рассеянный свет — за 15 дней. В высушенных органах при температуре 17-18° вирус не утрачивает своей активности 2 года; в гниющих трупах, зарытых в почву, инактивируется через 3 недели. В замороженном состоянии он не утрачивает вирулентности свыше 300 дней. Нагревание до 70° инактивирует вирус через 2 минуты. При кипячение тушек птицы больных псевдочумой вирус погибает через 40-60 минут.
Биологические процессы, развивающиеся при хранение помета, инактивируют вирус за 20дней. Вирус в активном состоянии в организме клещей, обитающих в птичниках может сохранятся до 213 дней. Вирус псевдочумы обладает способностью передаваться трансовариально нимфальным стадиям куриного клеща.
К действию дезинфицирующих препаратов в общепринятых концентрациях вирус не стоек. Он быстро погибает при воздействии на него 3%-ным раствором едкого натра, 4-5%-ным раствором ксилонафт-5.
Эпизоотологические данные. К заболеванию восприимчивы все домашние и дикие птицы отряда куриных (куры, индейки, цесарки, фазаны, павлины и др.). Степень восприимчивости птицы разных пород и возраста неодинакова. Более восприимчива молодая птица.
Наблюдаются случаи вспышек псевдочумы у цыплят при отсутствии заболевания взрослой птицы, находившиеся в контакте с молодняком. Утки и гуси устойчивы к заболеванию, но могут переносить инфекцию латентно и быть вирусоносителями.
Источником инфекции является больная, находящаяся в инкубационном периоде птица, а также грызуны и дикие птицы. Факторами передачи возбудителя могут быть необеззараженные птицепродукты и сырье (яйца, мясо, подстилка, корм, перо и пух, полученные от больных птиц) клещи, а также загрязненные выделениями больной птицы инвентарь, одежда и обувь обслуживающего персонала, транспортные средства и т.п. на которых возбудитель болезни способен сохраняться длительное время. Гуси и утки в ЛПХ и КФХ граждан, находящиеся совместно с больной птицей, способны передавать вирус в течение 2-4 недель. Вирус болезни ньюкасла может находится внутри снесенного яйца. При инкубации таких яиц вирус вызывает гибель эмбрионов с различными септическими изменениями. Погибший эмбрион гиперемирован, отечен, на голове и конечностях имеются массовые точечные кровоизлияния. Вирус на скорлупе погибает через 7-15 дней после начала инкубации.
В птичниках, содержащих большую партию больной птицы, вирус выделяется при работе вентиляторов, выбрасывающих использованный воздух на расстояние 1600м, при ветреной погоде на расстояние 3-5км.
Заражение птицы псевдочумой происходит алиментарным и аэрогенным способами, через корм, воду, воздух, при тесном контакте здоровой и больной птицы вирус способен выделятся в инкубационном периоде через 24 часа после заражения птицы, но обнаружить его удается и в организме переболевших в течение 2-4 месяцев после клинического выздоровления. При хроническом течении псевдочумы с поражением нервной системы вирус локализуется длительное время в головном мозге.
В промышленных хозяйствах с интенсивной поточной системой выращивания птицы псевдочума нередко приобретает стационарность. Это обусловлено длительным сохранением вируса во внешней среде в зимнее время года, переносом вируса дикой птицей и клещами, вирусносительством переболевших кур.
Патогенез. Заразительность вируса НБ очень велика, кровь больных птиц в разведении 1:125 000 000 обладает инфекционными свойствами.
После попадания вируса в организм птиц он фиксируется эритроцитами крови и разносится ими по всему организму, вызывая виремию. Размножение вируса в эритроцитах происходит в течение 4-12 часов после заражения. В дальнейшем вирус в большом количестве содержится в эритроцитах. Под воздействием вируса нарушается проницаемость гемато-энцефалического барьера, развивается вирусемия. Развивающийся вирус вызывает у птиц нарушение порозности кровеносных сосудов; в сердечной мышце развиваются дистрофические, дегенеративные изменения. Нарушается кровообращение, развивается гиперемия, появляются отеки и кровоизлияния. Поражение центральной нервной системы сопровождается негнойным энцефаломиелитом. Вирус размножается в легочной ткани, в воздухоносных мешках, селезенке, печени, почках и мозге, вызывая дистрофические, дегенеративные изменения и множественные кровоизлияния.
Симптомы и течение болезни. Инкубационный период 3-7 дней, иногда 9-12дней. Клинические признаки разнообразны в зависимости от дозы, вирулентности эпизоотических штаммов вируса, возраста птицы и условий содержания. Течение болезни может быть молниеносным, острым (велогенная), подострым(мезогненная) и хроническим(лентогенная). При молниеносном течении заболевшая птица погибает внезапно без выраженных клинических признаков. При остром течении аппетит у птиц резко ухудшается, а затем пропадает. У большинства заболевших птиц температура тела повышается до 44° С. У больной птицы появляется вялость, угнетение, малоподвижность, симптомы поражения нервной и дыхательных систем, развиваются коньюктивиты, роговица мутнеет. В ротовой и носовой полостях скапливается много слизи.
Птицы кашляют, чихают, издают «каркающие» звуки и дышат открытым клювом. Частый признак –понос, с выделением жидкого кала, окрашенного в зеленый цвет, иногда бывает примесь крови. При поражении центральной нервной системы походка становится шаткой, птицы совершают круговые движения, появляются параличи шеи, крыльев, ног, эпистотонус; смерть наступает через 3-12 дней после начала болезни при сильном истощении. Эту форму заболевания вызывают высокопатогенные азиатские штаммы вируса.
При подостром и хроническом течении наблюдают повышенную возбудимость птиц, судороги, парезы и параличи конечностей, дрожание головы, перекручивание шеи, сильное истощение. Эту форму болезни вызывают мезогенные штаммы вируса.
Атипичная форма ньюкастловой болезни зависит от наличия слабовирулентных штаммов вирусов в природных условиях, различной степени напряженности иммунитета у зараженной птицы, широкого применения антибиотиков и других факторов и характеризуется отсутствием или поздним появлением симптомов поражения нервной системы (парезов, параличей) и невысоким процентом гибели (до 15-30%).
Патологоанатомические изменения. Зависят от штаммов вируса, вызвавшего заболевание. При остром течении болезни преобладают изменения характерные для геморрагической септицемии.
Особенно патогномоничны кровоизлияния в слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта: кровоизлияния у основания слепых кишок, передней части прямой кишки, передней части 12-ти перстной кишки, кровоизлияния на границе мускульного и железистого желудков, изъязвления лимфатических бляшек кишечника, кровоизлияния на перикарде; слизистая оболочка органов дыхания- катарально воспалена.
При подостром течении отмечаем геморрагический энтерит, но без характерных для острого течения изъязвлений лимфатических бляшек, некротические очаги в печени.
При вялом течении болезни поражения преобладают в дыхательной системе (воздушных ходах, мешках), отмечаем закупорку трахеи большим количеством слизи. Для ньюкасловской болезни характерны кровоизлияния на слизистой оболочке в виде «геморрагического пояска» на границе между железистым и мышечным желудком.
Диагноз на псевдочуму ставят с учетом эпизоотических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным лабораторным исследованием по выделению и типизации вируса. В ветлабораторию направляют на исследование мозг, трахею, печень, селезенка. Из этих органов готовят суспензию, которой заражают 30-60-дневных цыплят и 9-12-дневных куриных эмбрионов. В случае положительной биопробы цыплята заболевают псевдочумой через 3-5 дней, эмбрионы погибают через 48-72 часа.
От погибших эмбрионов берут аллантоисную жидкость, которую исследуют по реакции гемагглютинации (РГА) и реакции задержки гемагглютинации.
Окончательно диагноз ставится на основании данных лабораторного исследования:
- выделение вируса из головного и костного мозга в начале заболевании в стадии вирусемии (3-5дней после начала заболевания) на куриных эмбрионах и культуре клеток фибробластов;
- биопробе (заражение 30-дневных цыплят) ;
- титрование вируса на куриных эмбрионах;
- серологической идентификации вируса в РГА, РТГА, ИФА, РСК и других методах.
Для ретроспективной диагностики используют РИГА с сывороткой крови от больной и переболевшей птицы. Желательно проводить двухкратное исследование с интервалом 20-30дней (метод парных сывороток).
Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить пастереллез, инфекционный ларинготрахеит, холеру кур, спирохетоз, классическую чуму, инфекционный бронхит кур, инфекционный бурсит, грипп птиц, парамиксовирусную инфекцию, респираторный микоплазмоз, отравления птиц.
Для острого пастереллеза характерна восприимчивость всех видов птиц, быстрая гибель заболевших; из внутренних органов выделяем вирулентных пастерелл.
При инфекционном ларинготрахеите у птиц поражается конъюктива, гортань, трахея, изменения в желудочно-кишечном тракте отсутствуют. У павшей птицы находим кровоизлияния и слизисто-геморрагические пробки в трахее.
Спирохетоз регистрируется в южных зонах страны и связан с наличием клещей-переносчиков. У павшей птицы селезенка увеличена в несколько раз, в масках крови находим спирохет.
Классическая чума отличается от псевдочумы преимущественным поражением взрослой птицы, коротким инкубационным периодом, отечностью головы и иммунобиологическим отличием выделенных штаммов вирусов при постановке РГА, РЗГА, ИФА и других методах.
При отравлениях ядохимикатами, поваренной солью поражается определенная группа птицы, получавшая ядовитый корм. Для исключения отравлений необходимо заменить подозрительный корм и поставить биопробу на токсичность путем скармливания подозрительного корма отдельной группе птиц.
Лечение. Эффективных лекарственных препаратов для лечения нет. В промышленных птицеводческих хозяйствах вся больная птица ввиду угрозы разноса инфекции подлежит уничтожению.
Иммунитет. После переболевания псевдочумой у птицы создается напряженный и длительный иммунитет. После вакцинации в сыворотке крови накапливаются антитела, которые зависят от возраста птицы, сроков, кратности и способа вакцинации.
В сыворотке крови переболевшей и вакцинированной птицы обнаруживаются комплементсвязывающие, нейтрализующие антитела и антигемаглютинины. Иммунные птицы трансовариально передают потомству пассивный иммунитет.
Специфическая профилактика. Все вакцины, используемые против болезни Ньюкасла, можно разделить на три основные группы: инактивированные; живые, ослабленные лабораторными методами; живые природно-ослабленные.
В России с 1980 года для профилактики болезни ньюкасла применяют жидкую инактивированную вакцину, которой вакцинируют птицу с 120-дневного возраста. Длительность иммунитета 6месяцев. В настоящее время промышленностью выпускается ассоциированная инактивированная вакцина против нескольких вирусных заболеваний.
Применяются живые вакцины из штаммов Ла-Сота, Бор-74, Н. В благополучных по ньюкасловской болезни зонах (наличие слабовирулентных полевых штаммов) наибольшую профилактическую эффективность получают о применения вакцины из штамма Бор-74 (ВГНКИ).
В неблагополучных зонах (Северный Кавказ, юг России при наличии высоковирулентных штаммов) более надежной является вакцина из штамма Ла-Сота отечественных производителей. Недостатком живых вакцин является их реактогенность, которая может приводить к снижению однородности среди молодняка, выхода мяса у бройлеров и яичной продуктивности у взрослых кур.
Наиболее эффективным способом вакцинации является индивидуальный интраназальный метод. Ветврачи на птицефабриках должны контролировать напряженность поствакцинального иммунитета в реакции РЗГА.
Напряженность и длительность иммунитета у птиц зависит от факторов кормления и содержания. Владельцы птицы за 5-7 дней до и после вакцинации должны увеличить в рационе содержание основных витаминов (А, Д и группы В).
Профилактика и меры борьбы. Профилактика псевдочумы птиц основывается на предупреждении заноса болезни в благополучные хозяйства с инкубационными яйцами, птицей, обслуживающим персоналом, инвентарем, кормом, подстилкой.
Территория птицеферм должна быть надежно ограждена, доступ посторонних лиц в птицеводческие помещения запрещают. Всю оборотную тару после вывоза мяса и яиц необходимо промывать горячим 3%-ным содовым раствором и дезинфицировать при 30-минутной экспозиции парами формальдегида, путем распыливания 40%-ного формалина из расчета 15-20мл на 1³ воздуха дезинфекционной камеры. Температура внутри камеры должна быть не ниже 12-15°. Для образования аэрозолей формальдегида применяют генераторы.
Окна, вентиляционные отверстия в птичниках должны быть закрыты сеткой с размером ячеек 1,5-3,5 см, препятствующей залету дикой птицы. Инвентарь, специальная обувь, халаты должны быть строго закреплены за каждым птичником и занумерованы или окрашены в определенный цвет. В крупных птицеводческих хозяйствах необходимо соблюдать позальное содержание одновозрастной птицы с соблюдением оптимальных разрывов между новыми партиями птицы.
Для профилактики ньюкасловской болезни владельцы птицы должны выполнять необходимые ветеринарно-санитарные требования по содержанию и уходу за ними:
- два раза в год дезинфицировать с профилактической целью птичники;
- всю вновь завозимую птицу необходимо в течение месяца содержать изолированно от остального поголовья.
При появлении заболевания постановлением Губернатора области хозяйство или населенный пункт объявляют неблагополучным по ньюкасловской болезни и карантинируют. Проводят мероприятия в соответствии с инструкцией о мероприятиях по борьбе с ньюкаслской болезнью (псевдочумой) птиц (Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 9июня 1976г. с изменениями и дополнениями от 28 августа 1978года.).
Карантин с неблагополучного хозяйства (предприятия) населенного пункта снимают через 30дней после последнего случая заболевания птиц ньюкаслской болезнью, санации помещения и территории хозяйства от возбудителя ньюкаслской болезни и проведения мероприятий предусмотренных вышеуказанной инструкцией.
В случаях, когда в неблагополучном по ньюкаслской болезни пункте поголовье птицы ликвидировано (убито) полностью, карантин снимают через 5дней после проведения заключительной дезинфекции всех птицеводческих помещений и вспомогательных объектов.
Донник Ирина Михайловна Директор ГНУ Уральского научно-исследовательского ветеринарного института (УрНИВИ). Член-корреспондент РАСХН, профессор
Шилова Евгения Николаевна Зав. отделом инфекционной патологии ГНУ УрНИВИ Кандидат ветеринарных наук, доцент
В последние годы большое внимание уделяется профилактике высокопатогенного гриппа птиц, как инфекции, представляющей возможную угрозу человечеству. Одним из наиболее эффективных средств профилактики гриппа А птиц является иммунопрофилактика. Вакцинация, не препятствуя инфицированию птицы, защищает ее от клинического проявления заболевания, увеличивая порог вирусной инфекции, необходимый для инфицирования привитой птицы, а также воздействует на эпизоотический процесс, ограничивая пути передачи и распространение инфекции (Ямникова С.С, Смоленский В.И., Хохлачев О.Ф. и др., 2007).
Как известно, эффективность применения вакцины оценивают по трём показателям: уровню поствакцинального иммунитета, выраженного в установлении протективных титров антител, заболеваемости и смертности птиц при экспериментальном или полевом инфицировании. Согласно «Инструкции по применению вакцины против гриппа птиц инактивированной эмульгированной» (2006), данная вакцина должна вызывать не менее чем у 80 % вакцинированных птиц накопление в крови антител к вирусу гриппа птиц в титре 1/16 со штаммом вируса, имеющего иную антигенную форму, иммунитет формируется в течение 28 дней после вакцинации.
Установлено, что интенсивность иммунного ответа у животных и птиц может отличаться на разных территориях, в случае, если на организмы влияют разные факторы внешней среды, в т.ч. и неблагоприятная экологическая обстановка (Бектимиров Т.А., Горбунов М.А., Никитюк Н.М. и др., 2001).
В связи с этим, нами проведены исследования напряженности и длительности иммунитета при вакцинации взрослых гусей против гриппа птиц А.
Нами проведена экспериментальная вакцинация разных видов домашней птицы против гриппа птиц А. Птицу содержали в опытных вольерах вивария. Рацион был стандартным на основе комбикорма. Ведение препарата организовывали в отдельном помещении, вынесенном за пределы птицепредприятий.
Вакцинацию гусей проводили разработанной в ФГУ ВНИИЗЖ инактивированной эмульгированной вакциной против гриппа птиц из шт. H5N1 (производство ОАО «Покровский комбинат биопрепаратов»). Вакцину вводили согласно наставлению: подкожно, в дозе 0,5 мл. на голову. Вакцинацию проводили трехкратно, с интервалом в 1 мес.
Для получения сыворотки кровь у гусей брали из яремной вены каждые 10 дней после вакцинации.
Уровень поствакцинальных антител в сыворотке эксперементальной птицы определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием стандартного диагностического набора.
Дополнительно у опытной и контрольной птицы определяли гематологические и иммунологические показатели. В цельной крови выявляли содержание гемоглобина (гемометром Сали), количество эритроцитов и лейкоцитов [И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев, 1980]. Подсчет эритроцитов и лейкоцитов осуществляли одновременно в камере Горяева по методике Фриед и Лукачевой в модификации Болотникова И.А Для характеристики клеточного и гуморального иммунитета (проводили количественное определение Т- и В- лимфоцитов [Л.С. Колабская, 1980].
Исследования проводились в течение 2005-2007 г.
Результаты исследования:
После проведенной вакцинации установлено, что уже через 10 дней во всех пробах сыворотки крови птиц выявляются антитела в протективных титрах. При этом разброс разведений, в которых обнаружены антитела, составляет от минимального — 1/16 до максимального — 1/256 (у 25 % птиц титры составили 1/16, у 8,3% — 1/32, у 16,6% — 1/64, у 16,6% — 1/128, у 33,3% — 1/256).
Однако уже через 30 дней после введения вакцины у гусей отмечено снижение титров антител, при этом у 33% гусей выявлены антитела ниже протективного титра (разведение 1/8). Таким образом, однократное введение вакцины не вызывало полноценную иммунную защиту у 67% птицы через 30 дней после первичной вакцинации.
Первую ревакцинацию птицепоголовья провели через 30 дней (третья декада). Анализ показал, что через 10 дней после ревакцинации было отмечено значительное снижение напряженности иммунитета у гусей. При этом у 33% птиц антитела совсем не выявляли, у 17%титр был ниже протективного (1/8), у 50 % в титре 1/16 — 1/32. То есть, повторное введение вакцины через 30 дней после предыдущей вакцинации (четвертая — пятая декада) искусственно снижает напряженность иммунитета вплоть до исчезновения антител, и птица в этот период становилась не иммунной к возбудителю гриппа птиц.
Через 14-21 день после ревакцинации (шестая декада) отмечали рост титра антител, при этом все 100% вакцинированных птиц имели специфические гемагглютинины в протективных концентрациях (1/16-1/128). Таким образом, после рекомендуемой наставлением однократной ревакцинации у птиц есть резистентность к данным заболеваниям.
После второй ревакцинации (седьмая декада) снижение концентрации антител не происходило, напротив, были отмечены максимальные титры (1/64-1/128), которые удерживались в течение месяца (70-100-й день опыта).
Начиная со 110-го дня опыта (одиннадцатая — двенадцатая декада), отмечено снижение концентрации антител к вакцин¬ному антигену . Также установлено, что в экспериментальной группе вакцинированных против ГП птиц ежемесячно отмечалось наличие, в среднем, 30-40% птиц, не имеющих иммунной защиты к вакцинному антигену, а, следовательно, к возбудителю гриппа птиц А. У остальных птиц концентрация специфических гемагглютининов оставалась низкая, но достаточная для защиты от заболевания (1/16-1/64).
К концу периода наблюдения (через 12 мес. после начала вакцинации) протективные титры сохранялись у 50% поголовья, средняя концентрация антител составила 1/42.
Обобщая полученные данные, можно отметить, что, в це¬лом, всех птиц данной популяции можно было условно разделить на три группы: с высоким уровнем антителообразования, со средним и с низким. При этом, если у птиц после первой вакцинации отмечались высокие титры антител, то и на протяжении всего периода наблюдения они продолжали оставаться высокими (1/128-1/512). Количество таких птиц в экспериментальной популяции было, в среднем, 15% .
У гусей, которые после первой вакцинации показывали низкие значения напряженности иммунитета, после 1 и 2 ре¬вакцинации уровень антител продолжал оставаться низким и, спустя 4-5 мес. после начала опыта, исчезал совсем. Данная группа птиц более половины срока наблюдения оставалась неиммунной после трехкратной вакцинации, их количество составляло, в среднем, 37%. Поголовье птицы, которое показывало средние уровни антителообразования (1/16-1/64), составляло, в среднем, 48%.
При проведении биохимических и гематоиммунологических исследований установлено, что у гусей перед вакцинацией отмечено низкое содержание у-глобулинов, средние значения данного показателя составили 17,6% от среднего содержания (при норме 35-37%). Также у гусей отмечено достаточно низкое содержание тимоцитов и В-клеток (34% и 21 % соответственно), изменение их соотношения (Т/В составило 2,1 у.е.), что свидетельствует об иммунологической недостаточности.
Проведенные исследования показали, что полноценный иммунный ответ на введение вакцины отмечен только после трехкратного введения вакцины с интервалом 30 дней, концентрация защитных антител у птиц удерживалась при этом до 12 мес. в протективных титрах. также необходимо отметить, что в популяции, в среднем, до 40% птиц не формируют иммунитет против ГП.
Заключение: Таким образом, исследованиями установлено, что при вакцинации гусей трехкратно с интервалом 1 мес, в среднем, 37-50% поголовья показывают низкий иммунный ответ на введение вакцины, что выражается отсутствием антител либо уровнем антител ниже протективного уровня (1/8). Данные исследования являются предварительными, поскольку проведены на ограниченном поголовье экспериментальной птицы и требуют дальнейших производственных опытов.