Реакции иммунитета с участием комплемента

Реакции лизиса: бактериолиза и лизиса

Специфические АТ, обуславливающие лизис (растворение) клеток, носят название лизинов. Эти АТ применительно к бактериям называются бактериолизинами, к эритроцитам – гемолизинами.

Лизины способны проявить свое лизирующее действие на АГ только в присутствии комплемента, который является составной частью любой свежей сыворотки.

Таким образом, в основе реакции лизиса лежит взаимодействие трех компонентов:

1) корпускулярного АГ (бактериальных клеток, эритроцитов и др. клеток);

2) специфических АТ иммунной сыворотки (бактериолизинов, гемолизинов и др.);

3) комплемента (сыворотка морской свинки).

В начале реакция идет по типу агглютинации, затем к комплексу АГ-АТ присоединяется комплемент. Наступает активация компонентов комплемента, которая приводит к лизису клеток (АГ).

В микробиологической диагностике реакция бактериолиза применяется для:

1) определения вида неизвестного микроба при помощи специфической сыворотки;

2) определения в исследуемой сыворотке наличия бактериолизинов к известному микробу.

Исследуемую сыворотку, для разрушения имеющегося в ней комплемента, инактивируют при 56 0С в течение 30 минут.

Под воздействием бактериолизинов в присутствии комплемента микробы теряют подвижность, меняют форму (набухают), распадаются и, наконец, совсем растворяются.

Реакция бактериолизиса применяется при холере с целью идентификации вибрионов и определения вибриолизинов в сыворотке (р. иммобилизации вибрионов холерными сыворотками); при сифилисе (р. иммобилизации трепонем), при лептоспирозе (р. агглютинации-лизиса); при возвратном тифе — с целью серодиагностики (р. лизиса).

Реакция гемолиза

Под влиянием реакции с АТ-ми в присутствии комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко красную прозрачную жидкость — «лаковую кровь» в следствии выхода гемоглобина. Реакция гемолиза используется как индикаторное при постановке диагностической реакции связывания комплемента (РСК), для титрования комплемента и гемолитической сыворотки.

Реакция связывания комплемента (РСК)

РСК отличается высокой чувствительностью и специфичностью и применяется для:

1) серологической диагностики инфекционных заболеваний (р. Вассермана – при сифилисе, р. Борде–Жангу – при хронической гонорее и др.);

2) идентификации бактерии и др. микробов.

РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвуют, кроме АГ и АТ, ещё гемолитическая система (р. гемолиза), выявляющая результат реакции.

РСК проводится в два этапа при участии двух систем:

1) первая система – АГ+АТ+комплемент – обуславливает связывание комплемента в том случае если АТ соответствует АГ. В случае же несоответствия АТ и АГ комплемент остаётся свободным;

вторая система (индикаторная) – гемолитеческая сыворотка (гемолизины) + эритроциты – показывает исход реакции в первой системе: в случае положительного результата реакции в первой системе (образования комплекса АГ+АТ+комплемент) во второй системе не произойдет гемолиза ввиду отсутствия комплемента (эритроциты оседают на дно пробирки). В случае отрицательного результата в первой системе вторая сопровождается гемолизом, т. к. образуется комплекс эритроциты + гемолизины + комплемент (см. прилож. 3, рис.7 и 8).

Компоненты реакции:

1) испытуемая сыворотка (предварительно инактивируют нагреванием при 56 0С в течение 30 минут);

2) антиген (изготавливается из взвесей убитых микробов, лизатов микробов, полных АГ, гаптенов, экстрактов тканевых липидов);

3) комплемент;

4) гемолитическая сыворотка;

5) 3% взвесь эритроцитов барана;

6) физиологический раствор;

7) контрольная сыворотка.

Комплемент. В качестве комплемента в РСК применяют свежую и высушенную сыворотку морской свинки, т. к. в крови морской свинки комплемент содержится в наибольшем количестве и присутствует постоянно, чем у др. животных. Перед постановкой РСК следует проводить титрование комплемента в реакции гемолиза (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент, физ. раствор) и определение рабочей дозы.

Титр комплемента – наибольшее разведение комплемента которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки.

Рабочая доза комплемента – количество комплемента, которое выше тира на 25%.

Гемолитическая сыворотка готовится путём иммунизации кроликов 50% взвесью эритроцитов барана. Полученную сыворотку инактивируют нагреванием при 56 0С. Определяют титр и рабочую дозу.

Титр сыворотки – максимальное разведение сыворотки которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии комплемента. В качестве рабочей дозы берут гемолитическую сыворотку в тройном титре.

РСК Борде –Жангу

Реакция ставится для диагностики хронической гонореи с целью обнаружения антител к гонококку.

В РСК участвует 2 системы: основная система – испытуемая сыворотка, антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система – гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.

Для реакции требуется:

1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инактивируется 30 минут при 56 0С на водяной бане.

2. Антиген — взвесь убитых гонококков.

3. Эритроциты барана получают из стерильно взятой дефибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 % взвесь эритроцитов.

4. Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.

5. Комплемент — свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровывается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1:10 и разливают его по пробиркам, от 0,1 до 0,5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1,5 мл.

Одновременно заготавливают гемолитическую систему — разведенная в тройном титре гемолитическая сыворотка + 3 % взвесь эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат 3 пробирки:

1. 1мл гемолитической системы + 1,5 мл физиологического раствора;

2. 0,5 мл комплемента 1:10 + 0,5 мл взвеси эритроцитов + 1,5 мл физиологического раствора.

Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановления реакции берут рабочую дозу комплемента, увеличенную против титра на 20-25 % т. е., обычно то количество комплемента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплемента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).

Источник

Реакции
с участием комплемента основаны
на
активации комплемента комплексом анти-

ген—антитело
(реакция связывания комплемента,
радиального гемолиза и др.).

Реакция
связывания комплемента (РСК)
заключается
в том, что при соответствии друг другу
антигены и антитела образуют иммунный
комплекс, к которому через Fc-фрагмент
антител
присоединяется комплемент (С), т. е.
происходит связывание комплемента
комплексом
антиген—антитело. Если же комплекс
антиген—антитело
не образуется, то комплемент остается
свободным (рис. 13.8). РСК проводят в две
фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей
три компонента антиген + антитело +
комплемент; 2-я фаза (индикаторная) —
выявление в смеси свободного комплемента
путем добавления к ней гемолитической
системы, состоящей из эритроцитов
барана, и
гемолитической сыворотки, содержащей
антитела к ним. В 1-й фазе реакции при
образовании комплекса антиген—антитело
происходит связывание им комплемента,
и тогда во
2-й фазе гемолиз сенсибилизированных
антителами эритроцитов не произойдет;
реакция положительная. Если антиген и
антитело
не соответствуют друг другу (в исследуемом
образце нет антигена или антитела),
комплемент
остается свободным и во 2-й фазе
присоединится
к комплексу эритроцит — ан-тиэритроцитарное
антитело, вызывая гемолиз; реакция
отрицательная.

РСК применяют для
диагностики многих инфекционных
болезней, в частности сифилиса
(реакция Вассермана).

Реакцию
радиального гемолиза (РРГ) ставят
в лунках
геля из агара, содержащего эритроциты
барана и комплемент. После внесения
в лунки геля гемолитической сыворотки
(антител против эритроцитов барана)
вокруг них
(в результате радиальной диффузии
антител)
образуется зона гемолиза. Таким образом
можно определить активность комплемента
и гемолитической
сыворотки, а также антитела в сыворотке
крови у больных гриппом, краснухой,
клещевым энцефалитом. Для этого на
эритроцитах адсорбируют соответствующие
антигены
вируса, а в лунки геля, содержащего
данные
эритроциты, добавляют сыворотку крови
больного. Противовирусные антитела
взаимодействуют с вирусными антигенами,
адсорбированными
на эритроцитах, после че-

го к этому комплексу
присоединяются компоненты комплемента,
вызывая гемолиз.

Реакция
иммунного прилипания (РИП) основана
на активации системы комплемента
корпускулярными антигенами (бактериями,
вирусами), обработанными иммунной
сывороткой.
В результате образуется активированный
третий компонент комплемента (СЗЬ),
который присоединяется к корпускулярному
антигену в составе иммунного комплекса.
На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах
имеются
рецепторы для СЗЬ, благодаря чему при
смешивании этих клеток с иммунными
комплексами, несущими СЗЬ, происходят
их соединение и агглютинация.

13.5. Реакция нейтрализации

Антитела иммунной
сыворотки способны нейтрализовать
повреждающее действие микробов
или их токсинов на чувствительные клетки
и ткани, что связано с блокадой микробных
антигенов антителами, т. е. их
нейтрализацией.
Реакцию нейтрализации (РН)
проводят
путем введения смеси антиген—антитело
животным
или в чувствительные тест-объекты
(культуру
клеток, эмбрионы). При отсутствии у
животных и тест-объектов повреждающего
действия микроорганизмов или их
антигенов, токсинов
говорят о нейтрализующем действии
иммунной сыворотки и, следовательно, о
специфичности взаимодействия комплекса
антиген—антитело (рис. 13.9).

Соседние файлы в предмете [НА УДАЛЕНИЕ]

Источник

61.
Реакции с
участием комплемента. Реакция связывания комплемента. Механизм, компоненты,
способы постановки, применение. Реакция радиального гемолиза

Реакции с участием
комплемента

Реакции
с участием комплемента основаны на
активации комплемента комплексом антиген—антитело (реакция связывания комплемента,
радиального гемолиза и др.).

Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу
антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т. е.
происходит связывание комплемента комплексом антиген—антитело. Если же
комплекс антиген—антитело не образуется, то комплемент остается свободным
(рис. 13.8). РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей
три компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (индикаторная) —
выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической
системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей
антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антитело
происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз
сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет; реакция
положительная. Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом
образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе
присоединится к комплексу эритроцит — ан- тиэритроцитарное антитело, вызывая
гемолиз; реакция отрицательная.

РСК
применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса
(реакция Вассермана).

Эту реакцию применяют для обнаружения антител в
сыворотке крови больных при бактериальных, вирусных, протозойных инфекциях, а
также для определения и типирования вирусов, выделенных у больных. РСК
относится к сложным серологическим реакциям, в которых, кроме антигена,
антитела и комплемента, участвует еще и гемолитическая система, выявляющая
результаты реакции. РСК протекает в две фазы: первая — взаимодействие антигена с
антителом при участии комплемента и вторая — выявление степени связывания
комплемента при помощи гемолитической системы. Эта система состоит из
эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, полученной путем иммунизации
лабораторных животных, эритроцитами. Эритроциты обрабатывают — сенсибилизируют,
присоединяя к ним сыворотку при температуре 37°С, в течение 30 мин. Лизис
сенсибилизированных эритроцитов барана наступает только в случае присоединения
к гемолитической системе комплемента. В отсутствие его эритроциты не
изменяются. Результаты РСК зависят от наличия в исследуемой сыворотке антител.
Если сыворотка содержит антитела, гомологичные антигену, используемому в
реакции, то образующийся комплекс антиген — антитело присоединяет, связывает
комплемент. При добавлении гемолитической системы в этом случае гемолиза не
произойдет, так как весь комплемент расходуется на специфическую связь
комплекса антиген — антитело. Эритроциты остаются не измененными, поэтому
отсутствие гемолиза в пробирке регистрируют как положительную РСК. При
отсутствии в сыворотке антител, соответствующих антигену, специфический
комплекс антиген — антитело не образуется и комплемент остается свободным. При
добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней и вызывает
гемодиз эритроцитов. Разрушение эритроцитов, их гемолиз характеризует
отрицательную реакцию.

Для постановки РСК необходимы: сыворотка больного,
комплемент, гемолитическая система, состоящая из эритроцитов барана и
гемолитической сыворотки, а также изотонический раствор хлорида натрия. Реакцию
ставят в серологических пробирках. Эритроциты барана получают из
дефибринированной крови барана путем троекратного отмывания их изотоническим
раствором хлорида натрия. Гемолитическую сыворотку выпускают в готовом виде в
ампулах, на этикетке которых указан ее титр, т. е. максимальное разведение
сыворотки, которое еще вызывает гемолиз при добавлении к эритроцитам в
присутствии комплемента. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации
животных, например кролика эритроцитами барана. При постановке реакции
сыворотку используют в тройном титре. Например, титр гемолитической сыворотки 1
: 1200, а рабочее разведение 1 : 400. В качестве комплемента используют свежую
сыворотку крови морской свинки (в течение 24—48 ч) или сухой комплемент в
ампулах. Предварительно перед постановкой РСК комплемент разводят 1 : 10 и
титруют для установления титра — наименьшего количества комплемента, которое
дает гемолиз эритроцитов при соединении с гемолитической системой, используемой
в данной реакции. Учитывая возможные антикомплементарные свойства антигена, при
постановке реакции к установленному рабочему титру комплемента делают 20—30%
надбавку.
Антигеном для РСК являются взвеси убитых бактерий, экстракты, приготовленные из
этих взвесей, отдельные химические фракции микробов. Основное требование к
антигену — отсутствие угнетения активности комплемента. Он не должен обладать
антикомплементарными свойствами. Для выявления этих свойств антигена комплемент
дополнительно титруют в присутствии используемого в реакции антигена.
Существуют определенные схемы постановки РСК. Результаты реакции учитывают по
наличию или отсутствию гемолиза эритроцитов в гемолитической системе. РСК
применяют при диагностике сифилиса (реакция Вассермана), гонореи (реакция
Борде—Жангу), токсоплазмоза, риккетсиозных и вирусных заболеваний.

Реакцию радиального гемолиза (РРГ) ставят в
лунках геля из агара, содержащего эритроциты барана и комплемент. После внесения
в лунки геля гемолитической сыворотки (антител против эритроцитов барана)
вокруг них (в результате радиальной диффузии антител) образуется зона
гемолиза. Таким образом можно определить активность комплемента и
гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови у больных гриппом,
краснухой, клещевым энцефалитом. Для этого на эритроцитах адсорбируют
соответствующие антигены вируса, а в лунки геля, содержащего данные эритроциты,
добавляют сыворотку крови больного. Противовирусные антитела взаимодействуют с
вирусными антигенами, адсорбированными на эритроцитах, после чего к этому
комплексу присоединяются компоненты комплемента, вызывая гемолиз.

Источник

Cмотрите так же…
Основы иммунологии
Предмет, цели и задачи иммунологии
Общая характеристика иммунной системы млекопитающих
Строение и характеристика центральных и периферических органов иммунной системы
Понятие об иммунитете. Естественный иммунитет. Активная и пассивная формы иммунитета.
Искусственный иммунитет и его роль в борьбе с инфекционными заболеваниями. Понятие о вакцинах и сыворотках, применяемых для профилактики инфекционных болезней
Конститутивные и индуцибельные защитные механизмы организма млекопитающих от инфекции.
Защитная функция кожи и слизистых оболочек млекопит-х.
Роль нормальной микрофлоры человека в защите от инфекции.
Развитие и характеристика фагоцитирующих клеток млекопитающих
Процесс фагоцитоза. Механизмы инактивации микроорганизмов фагоцитами.
Система комплемента, пути ее активации и механизм действия.
Общая характеристика иммунного ответа на тимусзависимые антигены, его этапы и конечный результат.
Развитие и характеристика антигенпредставляющих клеток, их локализация в организме
Процессинг антигена, его значение в развитии иммунного ответа
Т-лимфоциты, их развитие и локализация. Т-хелперы и их роль в развитии иммунного ответа на тимусзависимые антигены
В-лимфоциты, их развитие и локализация. Плазматические клетки и продукция антител
Иммунологическая память. Первичный и вторичный иммунный ответ
Характер взаимодействий антигенпредставляющих клеток
Понятие об антигенах. Общие свойства антигенов. Полные и неполные антигены.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Зависимость антигенных свойств от молекулярной структуры.
Классификация антигенов по происхождению. Типы антигенной специфичности
Функции Fаb- и Fс-частей молекулы иммуноглобулина
Генетические механизмы формирования специфичности иммуноглобулинов и переключения клеток на синтез иммуноглобулинов определенного класса
Паратоп и эпитоп. Характер взаимодействия антиген-антитело. Аффинитет и авидность
Агглютинация и преципитация. Реакции агглютинации и преципитации, применяемые в биологии и медицине
Иммуноэлектрофорез, его основные разновидности
Методы иммунофлюоресценции
Иммуноферментный анализ
Иммуноблотинг
реакции с участием комплимента.
Реакции нейтрализации, реакция опсонизации
Анафилаксия, анафилактический шок, сывороточная болезнь. Механизм возникновения гиперчувствительности немедленного типа. Аллергия и аллергены
Гиперчувствительность замедленного типа и механизмы ее развития
All Pages

реакции с участием комплимента.

Система комплемента — комплекс сложных белков, постоянно присутствующих в крови. Это каскадная система протеолитических ферментов, предназначенная для гуморальной защиты организма от действия чужеродных агентов, она участвует в реализации иммунного ответа организма.

Комплемент — система белков, включающая около 20 взаимодействующих компонентов: С1 (комплекс из трех белков), С2, СЗ, …, С9, фактор В, фактор D и ряд регуляторных белков. Все эти компоненты — растворимые белки, циркулирующие в крови и тканевой жидкости. Белки комплемента синтезируются в основном в печени. Большинство из них неактивны до тех пор, пока не будут приведены в действие или в результате иммунного ответа (с участием антител), или непосредственно внедрившимся микроорганизмом.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к комплексу антиген-антитело. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая тем самым гемолиз (разрушение) эритроцитов (реакция радиального гемолиза). Применяется для диагностики инфекционных болезней, в частности, сифилиса.

РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых, кроме антигена, антитела и комплемента, участвует еще и гемолитическая система, выявляющая результаты реакции.

РСК протекает в две фазы:

первая — взаимодействие антигена с антителом при участии комплемента и

вторая — выявление степени связывания комплемента при помощи гемолитической системы. Эта система состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки. Эритроциты обрабатывают — сенсибилизируют, присоединяя к ним сыворотку при температуре 37°С, в течение 30 мин. Лизис сенсибилизированных эритроцитов барана наступает только в случае присоединения к гемолитической системе комплемента. В отсутствие его эритроциты не изменяются. Результаты РСК зависят от наличия в исследуемой сыворотке антител. Если сыворотка содержит антитела, гомологичные антигену, используемому в реакции, то образующийся комплекс антиген — антитело присоединяет, связывает комплемент. При добавлении гемолитической системы в этом случае гемолиза не произойдет, так как весь комплемент расходуется на специфическую связь комплекса антиген — антитело. Эритроциты остаются не измененными, поэтому отсутствие гемолиза в пробирке регистрируют как положительную РСК. При отсутствии в сыворотке антител, соответствующих антигену, специфический комплекс антиген — антитело не образуется и комплемент остается свободным. При добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней и вызывает гемолиз эритроцитов. Разрушение эритроцитов, их гемолиз характеризует отрицательную реакцию.

Реакция гемолиза. Под влиянием антител и комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость — лаковую кровь вследствие выхода гемоглобина. Реакция широко применяется в лабораторной серологической практике в качестве показателя адсорбции комплемента при постановке диагностической реакции связывания комплемента (РСК). Реакция локального гемолиза в геле (реакция Ерне). Эта реакция является одним из вариантов гемолиза. Она позволяет определить число антителообразующих клеток в лимфоидных органах. Присутствие клеток, секретирующих гемолитические антитела — гемолизины, определяют по бляшкам гемолиза, возникающим в агаровом геле, содержащем эритроциты, при добавлении к ним исследуемой лимфоидной ткани и комплемента. Образование бляшек наблюдается только вокруг тех клеток, которые секретируют антитела к эритроцитам или к тому антигену, который был предварительно адсорбирован на них.

Реакция бактериолиза. Реакция бактериолиза состоит в том, что при соединении специфической иммунной сыворотки с соответствующими гомологичными ей живыми бактериями в присутствии комплемента происходит лизис микробов. Реакцию бактериолиза можно наблюдать как в пробирке (in vitro), так и в организме животного (in vivo). Эту реакцию используют при диагностике холеры. При постановке реакции бактериолиза в пробирках соединяют выделенную у больного культуру вибриона, специфическую иммунную противохолерную сыворотку и комплемент. Результаты учитывают после двухчасового выдерживания в термостате при 37°С путем посева материала, взятого из пробирки, на мясо-пептонный агар.

Источник