Серологическое обследование иммунитета к дифтерии

Серологическое обследование иммунитета к дифтерии thumbnail

Так как дифтерия может протекать в скрытой и бессимптомной форме, при подозрении на заболевание проводится бактериологическое исследование слизи и пленок с миндалин на палочку дифтерии (Corinebacterium diphtheriae).

Подробнее об услуге…

Результаты общего (клинического) анализа крови, как правило, готовы на следующий день. При необходимости можно заказать срочный анализ — в течение 2 часов.

Узнать больше об услуге…

Бактериологическое исследование слизи и пленок с миндалин на палочку дифтерии (Corinebacterium diphtheriae) можно сдать как в государственных клиниках, так и в частных лабораториях.

Найти лабораторию…

Многие коммерческие лаборатории время от времени предлагают клиентам различные акции, скидки и программы лояльности.

Подробнее…

При выборе лаборатории стоит обращать внимание на уровень сервиса и ценовую политику.

Услуги и цены…

Некоторые считают дифтерию проблемой из прошлого, болезнью-рудиментом, с которой повсеместно удалось успешно справиться. Но расслабляться еще рано. До сих пор регистрируются случаи этого заболевания, среди детей и взрослых циркулируют бактерии дифтерии. Поэтому о том, когда и какие анализы нужно сдавать на дифтерию, должен знать каждый.

Характеристика заболевания и особенности диагностики дифтерии

Дифтерия — это инфекционная болезнь, которой можно заразиться только от человека. Однако опасным может быть не только заболевший, но и носитель токсигенного (то есть производящего токсины) штамма. Такое носительство протекает без каких-либо признаков, и его можно обнаружить только с помощью лабораторного обследования.

Бактерии дифтерии — бациллы Леффлера — могут передаваться по воздуху с мельчайшими частичками влаги или пыли. Также бактерии могут передаваться при контакте с зараженными предметами обихода и изредка через зараженную еду.

На заметку
На предметах бактерии дифтерии могут жить до 5–6 месяцев, в пыли — до 5 недель, а в воде и молоке — до 20 дней. При этом прямые солнечные лучи и высокие температуры губительно действуют на эту бактерию.

При контакте с заболевшим или с носителем токсичного штамма вероятность заболеть примерно 15–20% [1]. Первые симптомы появляются через 2–10 дней. Повышается температура до 38–39°С, появляется боль в горле, становится сложно глотать. Признаки дифтерии сходны с ангиной, но при этом возникают и специфические симптомы.

Главная отличительная особенность — это тип поражения миндалин. На них образуется налет в виде плотных пленок. Свежие пленки снимаются достаточно легко, но они быстро утолщаются и становятся плотными. Если такую пленку с силой снять с миндалины, то под ней чаще всего образуется кровоточащая эрозия.

Такая типичная клиническая картина с высокой температурой, выраженной интоксикацией, ознобами, головной болью и бледностью кожи развивается у непривитых и имеющих слабый противодифтерийный иммунитет людей. При более высоком уровне иммунитета вместо пленок может образовываться рыхлый налет, а само заболевание протекает менее остро. Поэтому атипичные формы дифтерии легко можно спутать с обычной ангиной [2].

Однако дифтерия страшна не только сама по себе, но и своими осложнениями.

Среди них выделяют:

  • инфекционно-токсический шок;
  • миокардит — поражение сердечной мышцы;
  • полинейропатию — поражение периферических нервов;
  • нефрозы — дистрофические процессы в почках;
  • ДВС-синдром — нарушение свертываемости крови;
  • круп — осложненное стенозом гортани воспаление дыхательных путей [3].

Еще в середине XX века дифтерия была распространенной проблемой, вызывавшей осложнения, связанные с риском для жизни, у каждого пятого взрослого пациента и у каждого десятого заболевшего ребенка [4].

Пример из литературы
Михаил Булгаков в своем цикле рассказов «Записки юного врача» описывал дифтерийный круп у трехлетней девочки. Из-за отека, воспаления и большого количества дифтерийных пленок девочка задыхалась. В рассказе молодому врачу удалось спасти ее, сделав трахеотомию с серебряной трубкой. Когда дифтерия была распространенным заболеванием, такие случаи не были редкостью.

В 1955 году в СССР было официально зарегистрировано около 321 000 случаев дифтерии [5]. В 2015 году, 60 лет спустя, на всей территории России было зарегистрировано только 2 заболевших[6]. То есть заболеваемость снизилась практически в 160 000 раз.

Так как в России регистрируются только единичные случаи дифтерии, далеко не все молодые врачи за свою практику сталкивались с этим заболеванием. Тем более что она может протекать в стертой или бессимптомной форме, маскируясь под ангину и менее опасные заболевания. Поэтому своевременная лабораторная диагностика играет значительную роль в выявлении этого заболевания.

Кроме обследования пациентов с подозрением на дифтерию проводится регулярный серомониторинг — определение уровня иммунитета среди группы населения. Например, среди детей 3–4 лет, 16–17 лет и взрослых. Это помогает оценить коллективный иммунитет, вероятность возникновения вспышек и распространения заболевания [7].

Читайте также:  Печень как орган иммунитета

В лабораторной диагностике дифтерии существует несколько проблем. Если заболевший уже начал принимать антибиотики, то количество микробов на поверхности горла или носа будет минимальным. Из-за этого не всегда удается выявить микроб, особенно если пациент без консультации со специалистом «назначает» себе противомикробные препараты.

Еще одна проблема — это генетическая структура бактерии. Метод ПЦР позволяет выявлять токсигенные и нетоксигенные штаммы. Но у некоторых «безопасных» штаммов бактерии дифтерии есть скрытый ген, который отвечает за производство токсина. По данным молекулярного анализа таких бактерий может быть до 40%. При некоторых условиях этот ген может активироваться и бактерии внезапно становятся опасными для человека [8].

Какие анализы на дифтерию могут быть назначены?

Для диагностики дифтерии используются несколько методов — бактериологический, серологический и ПЦР-анализ, а также клинический анализ крови.

Основным методом, который позволяет установить диагноз, является микробиологическая диагностика дифтерии. Ее проводят при ангине с характерным выпотом на миндалинах, при подозрении на инфекционный мононуклеоз, паратонзиллярный абсцесс или ларинготрахеит. Это позволяет на самом раннем этапе исключить дифтерию.

С профилактической целью бактериологическое исследование проводят для поступающих на лечение или на работу в психоневрологические стационары, противотуберкулезные учреждения, дома ребенка. Такое обследование проводится, чтобы предотвратить вспышки инфекции в закрытом учреждении [9].

Для проведения бактериологического исследования с пораженной поверхности забирают мазок и помещают его в транспортную питательную среду. Примерно через 5–7 дней из лаборатории приходит ответ, есть ли в биоматериале рост дифтерийной палочки и обнаружены ли у нее токсигенные свойства. В норме роста быть не должно. Если в результатах исследования указан нетоксигенный штамм, это тоже в большинстве случаев не страшно. Достаточно провести профилактику по назначенной врачом схеме. А вот если выявлен токсигенный штамм, придется пройти полный курс лечения и обследовать всех контактировавших с пациентом лиц.

Как дополнение к бактериологическому методу могут использовать ПЦР-диагностику. Показания к ее проведению те же, что и для бактериологического метода. Но для установления диагноза она уже не является обязательной. Материал для ПЦР-исследования забирают из очага поражения и помещают в специальную среду. В лаборатории выделяют гены дифтерийной бактерии, в том числе отвечающие за ее токсичность. Интерпретируют результат так же, как и при бактериологическом методе: в лучшем случае следы присутствия бактерии не должны обнаружить. Если же выявлен токсигенный штамм, придется срочно проходить лечение.

Анализы на антитела к дифтерии, такие как РПГА или ИФА, позволяют оценить уровень иммунитета, защищенность от инфекции. Рост титров противодифтерийных антител более чем в 4 раза в течение двух недель является дополнительным критерием для установления диагноза. В качестве серомониторинга определение уровня антител проводится у «индикаторных» групп, о которых мы говорили выше. Для проведения серологических исследований забирают кровь из вены. В лаборатории из нее выделяют сыворотку и определяют в ней содержание антител. Это занимает примерно 2–5 рабочих дней.

При расшифровке результатов действует правило «чем больше, тем лучше». Если уровень антител ниже 1:10 или меньше 0,01 МЕ/мл в зависимости от метода исследования, иммунитета против дифтерии нет. Есть опасность заболеть и желательно провести вакцинацию, даже если раньше прививку уже делали. Если уровень иммунитета выше 1:1280 или больше 1,0 МЕ/мл — иммунитет против этой инфекции достаточно высок [10].

Еще один вспомогательный метод — клинический анализ крови. С его помощью нельзя отличить, например, дифтерию от ангины, но можно сказать, что воспаление вызвано бактериальной инфекцией. Для проведения этого анализа также берут кровь из вены. Этот анализ занимает всего 1–2 рабочих дня. При бактериальной инфекции повышается уровень СОЭ, количество лейкоцитов и нейтрофилов.

Где можно сдать биоматериал на исследование

Анализы на дифтерию можно сдать как в государственных клиниках, так и в частных лабораториях. Анализ крови можно сдать в любой лаборатории и, чаще всего, для этого даже не нужно будет направление врача. А вот специфические анализы на дифтерию проводят уже не все, поэтому лучше заранее уточнить этот момент.

Забор материала лучше сдавать в клинике с собственной лабораторией, особенно это касается бактериологического и ПЦР-исследования. Результаты этих анализов во многом зависят от того, насколько точно соблюдали правила забора мазков, хранения и транспортировки материала. При нарушении на любом из этих этапов можно получить ложный отрицательный результат.

В государственном учреждении по направлению все эти исследования можно пройти бесплатно. В частной лаборатории придется заплатить как за само исследование, так и за взятие биоматериала. Но и уровень сервиса при этом обычно выше. Например, некоторые лаборатории высылают результаты исследований на электронный адрес или публикуют их в личном электронном кабинете пациента, так что возвращаться за бланками уже не нужно. Их можно распечатать самостоятельно в любой момент.

Читайте также:  Как повысить иммунитет закаливанием

Несмотря на то, что дифтерия стала практически забытой проблемой, бактерия–возбудитель все еще представляет опасность, особенно для тех, чей иммунитет не может сопротивляться заболеванию. Поэтому стоит сдать анализы на дифтерию при ангине и подобных заболеваниях, исследовать кровь, а в идеале — заранее узнать свой уровень иммунитета против заболевания. Лучше перестраховаться, чем потом оказаться среди тех самых «единичных случаев» дифтерии, которые все еще регистрируются в России.

Источник

Метод определения
Иммуноанализ.

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Дифтерия — острая инфекционная болезнь, вызываемая токсигенными коринебактериями дифтерии (Corynebacterium diphtheriae); передается от человека к человеку воздушно-капельным путем, характеризуется местным фибринозным воспалением (преимущественно слизистых оболочек рото- и носоглотки), а также явлениями общей интоксикации и поражением внутренних органов. Источником инфекции является больной дифтерией или временный носитель токсигенных штаммов коринебактерий. Инкубационный период короткий – обычно 2-4 дня. Клинические формы дифтерии ротоглотки крайне разнообразны и зависят от характера и распространения фибринозной пленки, степени отека слизистой оболочки ротоглотки и подкожной клетчатки шеи, выраженности интоксикации. 

Основным фактором патогенности и вирулентности C.diphtheriae является дифтерийный экзотоксин. Возбудители, продуцирующие экзотоксин, определяются как токсигенные штаммы. Существуют нетоксигенные штаммы, которые не вызывают заболевания. Способность C. diphtheriae к выработке дифтерийного токсина зависит от действия коринефагов, которые содержат структурный ген молекулы токсина. Именно с действием дифтерийного токсина связаны большинство симптомов дифтерии и летальность от этой инфекции. 

Хотя чаще всего инфекция C. diphtheriae протекает бессимптомно или с относительно мягким течением, у непривитых детей и взрослых возможны тяжелые осложнения: отек горла, нарушение дыхания, поражение сердца, почек, нервной системы, высока частота летальных исходов (>10%). Имевшие место в прошлом, эпидемии дифтерии описаны в истории многих стран. Для предотвращения распространения этого заболевания в настоящее время используют систему организованной вакцинации, которая позволила значительно снизить уровень заболеваемости. 

Вакцины против дифтерии основаны на дифтерийном анатоксине (токсоиде)– модифицированном бактериальном токсине. В результате вакцинации образуются антитела против дифтерийного токсина. В программе вакцинации детей вакцина против дифтерии комбинируется с вакцинами против коклюша и столбняка (АКДС). После окончания серии первичной иммунизации средняя продолжительность иммунной защиты против дифтерии составляет около 10 лет. Защитный иммунитет может усиливаться естественной встречей с циркулирующими среди населения токсигенными линиями бактерий C.diphtheriae. Сведения о защитном уровне антител изложены в разделе «Интерпретация». 

Определение уровня IgG антител к дифтерийному анатоксину преимущественно используют для оценки эффективности вакцинации против дифтерии. Однако рост титров антител может служить дополнительным диагностическим признаком. Начальный диагноз дифтерии обычно может быть сделан на основании клинических признаков. Чтобы подтвердить острую инфекцию, следует выполнить прямое микробиологическое исследование материала, взятого с миндалин, ротоглотки (см. тест №469 «Посев на дифтерийную палочку»). Поскольку микробиологический метод может занять несколько дней, а серологические исследования (исследования антител) также требуют времени в связи с отсроченным формированием антител, принятие решений о лечении основывается, прежде всего на клинических симптомах.

Пределы определения: 0,01 МЕ/мл – 2 МЕ/мл

Литература

  1. Инфекционные болезни у детей. Ред. Д.Марри. М. Практика, 2006 г., с.928. 
  2. Ющук Н.Д., Кулагина М.Т. Дифтерия: клиническое течение, диагностика и лечение. Русский медицинский журнал, 1997.-Т.5,N 4.- с.208-217. 
  3. Всемирная организация здравоохранения: Diphtheria vaccine. Weekly epidemiological record,2006, Vol 81, No 3, p.24-32. https://www.who.int/wer/2006/wer8103.pdf 
  4. Материалы фирмы-производителя реагентов.

Источник

Дифтерию вызывают токсигенные штаммы Corynebacterium diphtheriae или палочки Леффлера, не токсигенные штаммы заболевания не вызывают. Дифтерийный токсин по своим свойствам относится к сильнодействующим ядам, уступая лишь ботулитическому и столбнячному. Под воздействием токсина нарушается синтез белков во внутренних органах больного, что приводит к структурным и функциональным нарушениям, демиелинизация нервных волокон – к параличам и парезам. Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы C.diphtheriae, инфицированные бактериофагом (р-фаг), несущим ген tox, кодирующий структуру токсина дифтерии. Передача бактериофагом гена tox нетоксигенным штаммам C.diphtheriae, обитающим в носоглотке и накопление их в популяции, может сопровождаться развитием вспышки дифтерии.

Наиболее таксономически близкими к виду C.diphtheriae являются C.ulcerans и C.рseudotuberculosis, природные патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей. Кроме того, на слизистой ротоглотки и носа часто встречается палочка Гофмана (C.pseudodiphtheriticum), не обладающая патогенностью и токсигенностью для человека. Поэтому основной задачей лабораторной диагностики дифтерии является выявление токсигенных штаммов дифтерии и дифференцировка возбудителя дифтерии от других коринебактерий, нормальных обитателей носо- и ротоглотки. Все микроорганизмы рода Corynebacterium – грамположительные полиморфные палочки, не образующие спор, хорошо растущие в аэробных условиях при 37°С. При окраске метиленовым синим в клетках C.diphtheriae отмечается внутриклеточная исчерченность, что объясняется наличием зерен волютина. Окраска по Граму не используется из-за вариабельности окрашивания клеток. По форме колоний и некоторым биохимическим свойствам C.diphtheriae подразделяются на культурально-биохимические варианты – gravis, mitis, intermedius, однако все они обладают способностью вырабатывать дифтерийный токсин. Тяжесть течения заболевания не связана с биохимическим вариантом C.diphtheriae. Токсигенные штаммы дифтерии более чувствительны к антибиотикам, чем не токсигенные.

Читайте также:  После прививки сколько времени иммунитет восстанавливается

Показания к обследованию

  • Профилактическое обследование – выявление источников инфекции, группы населения с повышенным риском заболевания; наблюдение за циркуляцией токсигенных штаммов в популяции; лица, поступающие в детские дома, школы интернаты, специализированные учреждения для детей и взрослых;
  • обследования по эпидемическим показаниям – лица с подтвержденным контактом с больным дифтерией или при эпидемии дифтерии в данной местности;
  • диагностические исследования – при подозрении на заболевание дифтерией (тонзиллит, назофарингит или ларингит который протекает с налетами псевдомембранозного характера).

Дифференциальная диагностика. Заболевания, сопровождающиеся тонзиллитом (инфекционный мононуклеоз, ангины стрептококковой, стафилококковой этиологии и др.).

При культуральных исследованиях возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis.

Материал для исследований

  • Мазок из ротоглотки и носа, при подозрении на дифтерию редких локализаций (глаз, рана, ухо и т.д.) – материал с пораженных участков, а также с миндалин и носа – культуральные исследования, обнаружение специфического фрагмента гена tox;
  • сыворотка крови – выявление АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает посев клинического материала с изучением токсигенных свойств на среде для определения токсигенности и биохимической идентификацией возбудителя, обнаружение АГ (дифтерийного токсина), выявление специфических АТ к дифтерийному токсину, обнаружение специфического фрагмента гена tox.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики и особенности интерпретации их результатов. Микроскопические исследования выполняют только для идентификации выделенной культуры. Микроскопия биологического материала не проводится.

Для посева используют материал соответствующих локализаций. Изучение токсигенных свойств на среде для определения токсигенности выполняют при использовании метода встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических АТ в плотной питательной среде. При отсутствии линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч инкубации культура признается не токсигенной. Для биохимической идентификации используется тест с цистиназой (среда Пизу), определение уреазной и сахаролитической (сахароза, глюкоза, крахмал) активности.

Выдача ответа:

  • при обнаружении специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 24–48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к культурально-биохимическому варианту gravis, mitis;
  • при отсутствии специфических линий преципитации на среде для определения токсигенности через 48 ч, положительной пробе на цистиназу, отрицательной пробе на уреазу, характерных культуральных и биохимических свойств дается заключение о выделении не токсигенного штамма C.diphtheriae принадлежащего к соответствующему культурально-биохимическому варианту;
  • при наличии линий преципитации на среде для определения токсигенности, идентичных линиям контрольного штамма дифтерии, положительных проб на цистиназу, уреазу, ферментации глюкозы и крахмала, отсутствие ферментации сахарозы, отсутствие редукции нитратов в нитриты, культуру относят к виду C.ulcerans, токсигенный вариант;
  • при выделении дифтероидов ответ выдается отрицательный.

При посеве возбудитель C.diphtheriae дифференцируется от других коринебактерий, в первую очередь C.pseudodiphtheriticum, C.ulcerans, C.pseudotuberculosis. Для выявления дифтерийного токсина используют методы РНГА или ИФА. Это исследование не является обязательным в практических бактериологических лабораториях, однако может использоваться как дополнительное для выдачи предварительного ответа. Метод также позволяет определить относительное (условное) количественное содержание токсина в исследуемой пробе.

Для выявления специфических АТ используют методы РПГА и РНГА. Метод РПГА используется для изучения напряженности противодифтерийного иммунитета. Условно-защитным титром АТ принят титр 1:20.

У больных определение титра АТ к АГ дифтерийной палочки в сыворотке крови методом РНГА проводится в двух пробах крови, собранных в начале заболевания и через 7–10 дней. Нарастание титра АТ в 3–4 раза во второй сыворотке относительно первой свидетельствует о перенесенной инфекции. Исследование используется преимущественно для ретроспективной диагностики дифтерии.

Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиболее быстрый и надежный метод лабораторной диагностики, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина. Описаны случаи нетоксигенных штаммов дифтерии, несущих в себе

Источник