Тест на иммунитет к туберкулезу

После первичного контакта с микобактериями туберкулеза (инфицирования) болезнь может перейти на следующу стадию и тогда разовьется латентная туберкулезная инфекция (ЛТИ).

ЛТИ — это еще не болезнь, но ее наличие — фактор повышенного риска развитие активной формы туберкулеза (болезни).

Внешне это совершенно здоровые люди!

По оценкам, у 10% иммунокомпетентных лиц с ЛТИ й в течение жизни развивается туберкулез.

• Примерно у половины этих людей заболевание туберкулезом развивается в течение первых двух лет после заражения,
• У второй половины туберкулез может развиться в течение жизни.

Риск прогрессирования от туберкулезной инфекции к туберкулезному заболеванию повышается у лиц с ослабленной иммунной системой.

Задача скрининга на туберкулез — вовремя выявить эти 10% людей, у которых произошел переход от простого инфицирования к ЛТИ и назначить им профилактическое лечение, чтобы не допустить перехода к стадии болезни. Около 2 миллиардов человек в мире имеют ЛТИ, но только у 10 млн в год есть риск заболеть туберкулезом.

Проба Манту в скрининге и диагностике

Если вы внимательно прочитали статью про пробу Манту, то знаете, что туберкулин, применяемый для проведения пробы Манту — это смесь множества антигенов человеческих (M. tuberculosis) и бычьих (M.bovis) микобактерий, а вакцина БЦЖ — это пра-пра-правнучка M.bovis.

Сложив вместе эти два факта мы получаем основной недостаток пробы Манту:

она хорошо справляется с задачей динамического скрининга, но хуже подходит для сиюминутной диагностики, т.к. может давать (+) реакцию у большинства привитых БЦЖ

В странах, где нет массовой вакцинации БЦЖ, пробой Манту пользоваться гораздо удобнее, не только как скрининговым методом, но и диагностическим. Но вот беда — именно там она не нужна массово, т.к. в этих странах совсем другой уровень заболеваемости туберкулезом и поголовный скрининг просто не нужен, только группам риска и то не везде. А там где массовый скрининг необходим (из-за высокой распространенности туберкулеза и высокого риска заражения) — всех прививают БЦЖ (ровно по той же причине). В этих странах продолжает оставаться актуальным вопрос дифференцирования постВакцинальной и постИнфекционной чувствительности к туберкулину.

Еще один недостаток пробы Манту состоит в том, что с ее помощью мы чаще всего не можем провести границу между инфицированием и латентной туберкулезной инфекцией (ЛТИ).

Новая страница в истории

В начале 2000-х появилась новая технология иммунодиагностики туберкулеза — Interferon-gamma release assays (IGRAs) — “тест высвобождения гамма-интерферона”.

Для проведения такого теста требуется забор крови из вены и ее исследование в лаборатории под воздействием микобактериальных антигенов. По сути, мы добиваемся такой же реакции, как при проведении пробы Манту, только вне организма и с некоторыми важными отличиями:

1. В отличие от туберкулина, применяемого для проведения ПМ, в IGRA-тестах для активации лимфоцитов применяют смесь из нескольких ВЫБОРОЧНЫХ антигенов (2 или 3 шт, в зависимости от теста). Эти антигены были выбраны потому, что они не встречаются в вакцинных штаммах БЦЖ и не свойственны большинству неТуберкулезных микобактерий, но присутствуют у возбудителя ТБ человека (M. tuberculosis) и других микобактериях “туберкулезного комплекса” (M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canetti), потенциально патогенных для человека.

2. Еще одним важным отличием этих тестов от ПМ является то, что они выявляют реакции, присущие только лицам с наличием “активированного” инфекционного процесса начиная с ЛТИ, не затрагивая самую первую стадию — инфицирование. Представьте, что вы купили сим-карту и забыли про нее. Никто не знает, что она у вас есть. А если вы ее активировали и начали звонить с этого номера (не важно, один звонок был, или 1000), это уже можно отследить. Так же и тут.

Механизм работы IGRA-теста

✔️ В организме, в котором есть инфекционный ТБ процесс, вызванный M.tuberculosis, Т-лимфоциты под воздействием микобактериальных антигенов (МБА), специфических для этого возбудителя, начинают выделять гамма-интерферон (IFNγ).

✖️ В организме, где ТБ процесса нет, такой реакции НЕ БУДЕТ.

Эта методика не позволяет установить факт инфицирования. Только наличие “активированной” инфекции, начиная со стадии ЛТИ.

Чтобы эту реакцию “засечь”, нужно

• — взять кровь пациента с жизнеспособными иммунными клетками
• — выделить из нее лимфоциты
• — добавить к ним МБА и оставить на какое-то время, чтобы произошла реакция
• — посмотреть, начнут ли Т-лимфоциты выделять IFNγ

Т-спот — одна из разновидностей методики ELISpot

В России доступно 2 вида IGRA-тестов:

• QuantiFERON [Квантиферон] — рег.в РФ в 2010
• T-SPOT.TB [Т-спот] — рег.в РФ в 2012

Хотя они и основаны на одном принципе, но имеют отличия в методике детекци:

✔️ T-SPOT — проводится подсчет количества КЛЕТОК, которые выделяют IFNγ. Подсчет ведут по окрасившимся “отпечаткам” лимфоцитов на дне лунки, где происходила инкубация.

✔️ QuantiFERON — определяют количество (концентрацию) IFNγ в исследуемом образце.

Когда я готовила этот материал у меня сложился пазл! Эта разница в методах заложена прямо в их названиях!

Отпечатки = пятна = spot. А “Т” — это “Т-лимфоцит”. То есть T-SPOT = буквально “отпечаток Т-лимфоцита”.

QuantiFERON — от “Quanti” — “количество” и “FERON” — интерферон

Еще одним важным отличием является точка контакта клеток крови с антигенами:

T-SPOT.TB — Забор крови производится в обычную пробирку. Ее доставляют в лабораторию и уже там проводят инкубацию с МБА.

QuantiFERON — при применении наборов последнего поколения (QuantiFERON Golg in Tube) pабор крови осуществляется в специальные пробирки (несколько штук), в которые УЖЕ содержат МБА, + пробирки с положительным и отрицательным контролем. Так что контакт с МБА начинается сразу.

Обратите внимание, что данные тесты не выявляют сами микобактерии как таковые, а только признаки их активности. А еще не дают ответа ГДЕ именно в организме (в легких, почках, кишечнике…), поэтому также как и кожные пробы должны оцениваться в комплексе с другими методами диагностики.

ПЛЮСЫ IGRA-тестов

➕ Высокая специфичность и отсутствие перекрестной реакции у привитых БЦЖ

➕ Более объективная оценка результатов (в сравнении с кожными пробами)

➕ Не нужен отдельный визит к врачу для оценки результата, как при кожной пробе

➕ Подходит для лиц с абсолютными противопоказаниями к проведению кожных проб

МИНУСЫ IGRA-тестов

➖ Требуется забор крови из вены Для маленьких детей это является серьезным лимитирующим фактором. Для квантиферонового теста крови нужно МНОГО (3-4 пробирки). Для Т-спота — меньше (одна пробирка). Например, если родители против прививок и кожных тестов, то им нужно 2 раза в год брать у ребенка кровь из вены начиная с 6-месячного возраста…

➖ Стоимость Это очень дорогие исследования, и не только в России. На сегодня Квантифероновый тест в СПб с забором материала — 6000р, Т-спот 8000р. Для массового скрининга могут применяться только в странах с очень высоким уровнем дохода.

➖ Логистика — Температура транспортировки и хранения. Как уже озвучила в описании методики, для выполнения анализа нужна кровь с живыми клетками! Нарушение температурного режима (+18- +25) может привести к тому, что материал будет испорчен и анализ недостоверен. Для Т-Спот это принципиально, тк контакт с антигенами происходит уже после транспортировки. Это может привести к ложно-отрицательному результату! — Образцы крови должны быть проанализированы через 8-24 часов после забора (для T-spot — 32 часа).

➖ Специальное лабораторное оборудование, обученный персонал. Для проведения кожных проб не требуется специального оборудования, манипуляция осуществляется медицинским персоналом. Для проведения IGRA-тестирования требуется гораздо больше. Поэтому в России существует всего порядка 50 лабораторий, которые могут самостоятельно их выполнять. В большинстве мест происходит только забор крови, а выполнение осуществляется по договору в другом месте, чаще в большой коммерческой профильной лаборатории в Москве.. Для родителя этот пункт не имеет большого значения, это, скорее, к вопросу доступности и соблюдения предыдущего пункта, если речь идет об удаленном от центра регионе.

Для стран с низким уровнем доходов рекомендации ВОЗ таковы:

“IGRA более дорогостоящий и технически сложный процесс, чем проба Манту. Учитывая сопоставимую производительность, но повышенную стоимость, замена пробы Манту на IGRA-тесты в качестве метода скрининга в условиях ограниченных ресурсов не рекомендуется. Коммерческие IGRA-тесты одобрены FDA как косвенные и дополнительные тесты на инфекцию ТБ в сочетании с оценкой риска, рентгенографией и другими медицинскими и диагностическими оценками. Существует несколько международных руководств по их использованию в странах с высоким уровнем дохода”. [1]

Что говорит по поводу IGRA-тестов Medscape?

▪️ Исследования, оценивающие показатели IGRA у детей, скудны.

▪️ Неопределенные результаты для детей являются потенциальным ограничением для внедрения IGRA в клиническую практику. Частота неопределенных результатов IGRA у детей различна (диапазон 0–17%), и большинство из них связаны с низким уровнем реакции на стимуляцию микобактериальными антигенами в результате недостаточной иммунологической зрелости. Неопределенные результаты анализа QFT-InTube чаще встречаются среди детей младшегоо́возраста.

▪️ Трудности в сборе крови для этих анализов и потребность в относительно большом объеме крови у маленьких детей (особенно у младенцев) также являются ограничениями. [2]

Из инструкции к набору Т-Спот

Эффективность теста T-SPOT.TB не была адекватно оценена с образцами от лиц моложе 17 лет, у беременных женщин и у пациентов с гемофилией [3]. А ведь как правило желание сделать не Манту, а такой тест есть у родителей МАЛЕНЬКИХ детей.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ

ОЧЕНЬ расстраивает информация из рунета, сильно искажающая сведения об этих тестах в позитивную сторону, и умалчивая о недостатках. Особенно бросается в глаза то, что у этих тестов якобы вообще нет противопоказаний и ничто не влияет на результаты теста. Как так? В организме влияет, а в пробирке не влияет? Клетки те же самые, только их достали. В западных источниках информация больше похожа на правду. CDC рекомендует соблюдать не менее 4-6 недель интервала между живыми инъекционными вакцинами (КПК, Ветряная оспа) и проведением этого теста. После перенесенной кори, краснухи, паротита и ветрянки, соответственно, тоже! Так что в случае плановой вакцинации живыми инъекционными вакцинами стОит делать забор крови до вакцинации либо в один день с прививкой.[3]

ВЫВОДЫ

IGRA-тесты — это не панацея. У них есть свои преимущества и свои недостатки. У них тоже бывают ложно(+) и ложно(-) результаты. Это не полные аналоги пробы Манту (не выявляют стадию инфицирования) и маловероятно, что в ближайшее время в России или странах постсоветского пространства станут применяться в качестве метода скрининга ТБ. Только как дополнительный метод диагностики. Хотя, благодаря локализации производства в России цена на T-SPOT.TB в ближайшее время может быть снижена, а тест станет доступен по ОМС для лиц с реальными противопоказаниями к проведению кожных проб. Приведу аналогию. Если вам нужно просто перевезти из точки А в точку Б 100 человек, то оптимально будет нанять автобус. Если у вас 10 человек, то вам хватит маршрутки. А если нужно срочно доставить пострадавшего в больницу, то машина скорой помощи. Для разных задач разные решения являются лучшими.

Если я отказываюсь от проведения проб реакции Манту или Диаскин-теста моему ребенку, какие другие методы ранней диагностики туберкулеза в настоящее время имеются?

При отказе родителей ребенка от проведения внутрикожных проб на туберкулезную инфекцию, возможно назначение альтернативных методов обследования с целью исключения туберкулеза у ребенка. К таким методам обследования относятся следующие диагностические тесты: квантифероновый тест (QuantiFERON-TB Gold) и тест T-SPOT.TB. В обоих случаях для проведения исследования осуществляется забор крови из вены. Положительные результаты тестов указывают на активность туберкулезной инфекции и предполагают назначение дополнительного обследования для исключения локального туберкулеза. Отрицательные результаты тестов in vitro при отсутствии клинических симптомов заболевания позволяют врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза. (с сайта правительства СПБ) [7]

1 Рекомендации ВОЗ по применению IGRA тестов в странах с низким уровнем доходов

2 Рекомендации MedScape про применению QuantiFERON-TB теста (QFT), QuantiFERON-TB Gold теста (QFT-G), QuantiFERON-TB Gold In-Tube теста (QFT-GIT), и T-SPOT.TB теста (T-Spot).

3 T-SPOT.TB — инструкция по применению (оригинал)

4 QuantiFERON-TB Gold Plus — описание метода (на русском)

5 QuantiFERON-TB Gold Plus — Инструкция по применению (оригинал)

6 Презентация ВОЗ о QuantiFERON-TB Gold Plus

7 Какие методы исследования годятся, если я хочу отказаться от пробы Манту и Диаскинтеста? (Сайт правительства СПБ)

По данным ВОЗ треть населения планеты инфицированы микобактерией туберкулёза, то есть имеют латентную туберкулёзную инфекцию (ЛТИ). В большинстве случаев при проникновении микобактерии туберкулёза в организм человека иммунная система не допускает размножения микроорганизма и дальнейшего развития заболевания. При этом происходит «знакомство» клеток иммунитета с возбудителем, а в организме формируется иммунная память о нем.

Для большинства людей латентная форма туберкулёза не опасна. Но при нарушении работы иммунитета «спящие» микобактерии могут «проснуться» и развиться в активную форму туберкулёза. Поэтому ВОЗ рекомендует проходить тестирование на наличие ЛТИ всем относящимся к группе риска: больным ВИЧ-инфекцией; людям, контактировавшим с пациентами с лёгочной формой туберкулёза; пациентам, начинающим лечение препаратами из группы ингибиторов фактора некроза опухоли (ФНО); пациентам на диализе; пациентам, готовящимся к трансплантации органов, а также пациентам с силикозом. Если туберкулёз в скрытой форме будет обнаружен, с помощью специальной профилактики можно будет предотвратить его развитие в активную форму.

Есть несколько анализов на скрытую форму туберкулёза, и у каждого из них есть свои плюсы и минусы. Это кожные тесты: проба Манту и Диаскинтест (применяется только в РФ), а также пробирочные тесты на высвобождение интерферона гамма (их ещё называют IGRA-тесты: T-spot.TB, QuantiFERON®-ТВ Gold).

Проба Манту
Этот тест используется во всём мире на протяжении более 100 лет. Как он работает? Под кожу вводят специальный препарат туберкулин. Это неполный антиген туберкулёза, который не способен вызвать заболевание или развитие иммунитета к нему, но зато спровоцирует специфическую реакцию организма. Через 72 часа врач осматривает место укола — если образуется крупное уплотнение на коже, то это говорит о наличии туберкулёза в скрытой форме. К сожалению, туберкулин содержит много компонентов, и кроме специфической реакции, которая говорит нам о туберкулёзе, возможна и неспецифическая реакция — уплотнение может появиться, а вот микобактерий в организме не будет. Поэтому при проведении пробы Манту высока вероятность ложноположительного результата. Кроме того, возникновение специфической реакции на туберкулин возможно после вакцинации БЦЖ, но её влияние уменьшается со временем, и через 10-15 лет она не оказывает практически никакого влияния.

Диаскинтест (Аллерген туберкулёзный рекомбинантный)

Отечественный препарат, который используется только в России, применяется с 2010 года. Содержит два антигена, присутствующие в вирулентных штаммах микобактерий туберкулёза и отсутствующие в вакцине БЦЖ. Диаскинтест вводится так же, как и проба Манту, — под кожу. Оценка реакции кожи в месте введения препарата проводится также через 72 часа. В отличие от туберкулина в Диаскинтесте только 2 антигена, поэтому он обладает более высокой чувствительностью и специфичностью, чем проба Манту, то есть с большей вероятностью покажет реакцию на туберкулёз, если он есть, и с меньшей вероятностью даст ложноположительную реакцию.

IGRA-тесты

В мире на сегодняшний день существует два подобных теста: T-spot.TB и QuantiFERON®-ТВ Gold (также может называться QFT или квантифероновый тест). Для исследования берётся венозная кровь. В основе этих методов лежит выявление интерферона гамма, который выделяется CD4-лимфоцитами в результате взаимодействия с микобактериями туберкулёза. Результаты теста более специфичны в сравнении с пробой Манту и не зависят от предшествующей вакцинации БЦЖ или от аллергических реакций, которые возможны при кожных тестах. Некоторые страны с низкой заболеваемостью туберкулёзом и высоким уровнем дохода (например, Швейцария, Франция, Германия) отказались от реакции Манту и для диагностики в группах риска применяют только IGRA-тесты.

Идеального теста для диагностики ЛТИ, который являлся бы «золотым стандартом» во всем мире, нет. И кожные иммунологические тесты, и тесты пробирочные при положительном результате не позволяют достоверно отличить ЛТИ от активного туберкулёза. Они лишь с высокой вероятностью свидетельствуют о наличии в организме человека клеток, которые уже однажды сталкивались с микобактерией туберкулёза; при этом невозможно определить, когда эта «встреча» состоялась – сейчас или много лет назад.

IGRA-тесты являются более дорогостоящими и технически сложными анализами по сравнению с кожными тестами. Поэтому, учитывая сопоставимые показатели эффективности и более высокую стоимость, ВОЗ не рекомендует заменять кожные тесты анализом IGRA в рамках системы общественного здравоохранения в странах с низким и средним уровнем дохода. Однако для индивидуального тестирования IGRA-тесты наиболее предпочтительны.

Результат тестов напрямую зависит от состояния иммунной системы организма. Некоторые заболевания могут снижать иммунологическую реактивность организма, что приводит к появлению ложноотрицательных результатов тестов. Значительное влияние на результат иммунологических тестов оказывает ВИЧ–инфекция, поскольку вирус поражает CD4-лимфоциты, а именно эти клетки принимают основное участие в формировании ответа при диагностике туберкулёза. При значительном снижении CD4-лимфоцитов иммунная система просто не в состоянии отреагировать. Эффективность кожных тестов снижается пропорционально уровню CD4-лимфоцитов, и при снижении клеток ниже уровня 200 в мкл они становятся практически неинформативными. На точность IGRA-тестов уровень иммуносупрессии практически не оказывает влияния.

Поэтому сначала рекомендуют проведение кожных тестов, а IGRA — при подозрении на ложноотрицательный кожный тест или если в анамнезе присутствует вакцинация БЦЖ.

Американский Центр контроля заболеваний (CDC) рекомендует IGRA-тесты для тестирования лиц, которые имеют низкую вероятность повторного посещения врача для оценки кожных проб, например бездомных и потребителей наркотиков. Кожные тесты являются предпочтительным для тестирования детей в возрасте до пяти лет, так как для их проведения не требуется венозная кровь.

Для кожных тестов противопоказаниями являются наличие аллергических и кожных заболеваний (дерматит, псориаз в активной форме), бронхиальная астма, прививки, проведённые меньше месяца назад. При таких противопоказаниях тест может дать неопределённый или ложноположительный результат. Для IGRA-тестов подобных ограничений нет, их предлагают в случае противопоказаний к выполнению кожных тестов.

К сожалению, ни IGRA, ни кожные тесты не могут предсказать, разовьется ли туберкулёз из своей латентной формы. Положительный результат IGRA-тестов может говорить только о чуть большей вероятности. Поэтому на данный момент выбор теста нужно делать исходя из противопоказаний, стоимости и логистики — проба Манту или Диаскинтест дешевле, но часто могут вызвать ложноположительную реакцию и требуют повторного посещения врача.