Методы оценки состояния иммунитета
КАТЕГОРИИ:
Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748)
Иммунологические исследования, проводимые при различных заболеваниях, не являются стандартными, кроме того, комплекс общепринятых тестов первого и второго уровня в каждом конкретном случае и у каждого индивидуума будут отличаться. Так, например, оценка факторов местного иммунитета наиболее значима при заболеваниях бронхолегочного аппарата и урогенитального тракта. В этом случае анализ этих параметров более информативен, чем показатели системного иммунитета.
При оценке иммунного статуса по отношению к конкретному заболеванию, применяются не только общие тесты (включая лейкоцитарную формулу), но прежде всего исследуется состояние определяющего иммунитет звена, например, при туберкулезе – активность Т-клеточного звена с помощью пробы Манту или реакции торможения миграции лейкоцитов в присутствии антигена.
При дифтерии, где выражен антитоксический иммунитет, достаточно определения в сыворотке крови специфических антител, а исследование иммуноглобулинов M, G, A или определение бластной трансформации В-лимфоцитов, выяснение содержания антигенспецифических лимфоцитов практически ничего не добавляют.
При выборе методов исследования необходимо помнить о предполагаемом патогенезе заболевания. Например, при аутоиммунных заболеваниях для подтверждения диагноза может применяться иммунофлуоресцентный метод с антигенами пораженных органов для обнаружения аутоантител. Кроме того, например, при аутоиммунном тиреоидите, в патогенезе которого важную роль играют аутоантитела, цитотоксическое действие могут оказывать и лимфоциты, поэтому в этом случае целесообразно назначение реакций по типу ГЗТ, т.е. РТМЛ и РБТЛ.
В диагностике ревматоидного артрита важную роль играет определение аутоантител против синовиальных оболочек суставных тканей; в то же время РБТЛ и РТМЛ подтверждают лимфоцитарную инфильтрацию в синовиальной ткани.
Системная красная волчанка вызывается антителами, но направленными не против определенного органа, а против ДНК ядер клеток. Образующиеся иммунные комплексы циркулируют в крови, откладываясь на эндотелии сосудов, в синовиальных оболочках и на клеточных мембранах паренхиматозных органов. Поэтому при этом заболевании целесообразно назначение иммуноферментного анализа для определения концентрации ЦИК.
При вторичных иммунодефицитах важно определить, какие звенья врожденного и адаптивного иммунитета (Т-система, В-система, комплемент или фагоцитоз) функционально неполноценны. Для этого необходимо изучение параметров фагоцитарной системы, а также количественных и функциональных показателей Т- и В-звеньев адаптивного иммунитета, в частности, проводится определение субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и их соотношения CD4+/CD8+, которое носит название иммунорегуляторного индекса (ИРИ).
Иммунорегуляторный индекс раньше было принято трактовать как соотношение субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров, так как все CD4+ Т-лимфоциты однозначно считались Т-хелперами, а субпопуляции CD8+ Т-лимфоцитов приписывали главным образом функции супрессорных и киллерных клеток. Считалось, что CD8+ Т-супрессоры подавляют антигенспецифический ответ как клеточного, так и гуморального типа за счет ингибирования функций Т-хелперов.
В настоящее время установлено, что, в связи с открытием сложной системы регуляторных взаимодействий между клетками в процессе адаптивного иммунного ответа, трактовка ИРИ представляется сложной и неоднозначной. Величина этого показателя более или менее адекватно характеризует, по-видимому лишь степень гибели CD4+ Т-клеток при СПИДе. Это обусловлено по крайней мере двумя причинами. Во-первых, установлено, что клетки одной и той же CD4+-субпопуляции одновременно могут выполнять функции хелперов и супрессоров по отношению к разным типам адаптивного иммунного ответа. Так, CD4+Тх1, продуцируя ИЛ-2 и IFN-γ, стимулируют дифференцировку CD8+ ЦТЛ и развитие фагоцитарного типа иммунного ответа. Однако с помощью этих же цитокинов они оказывают супрессорное действие на образование Тх2 и их функции. Аналогичным образом Тх2, стимулируя синтез цитофильных антител и секреторного IgA, с помощью ИЛ-10 и ИЛ-4 супрессируют дифференцировку и основные функции макрофагов и Тх1.
Во-вторых, открытие истинно супрессорной субпопуляции CD4+25+FoxP3+ регуляторных Т-лимфоцитов, участвующих как в механизмах толерантности, так и в регуляции адаптивного иммунного ответа, также свидетельствует о трудности адекватной интерпретации значений ИРИ у больных с различными видами иммунопатологии.
Необходимо также помнить, что в конкретной ситуации эффект деятельности субпопуляций Т-лимфоцитов определяется не общим количеством CD4+ и CD8+ Т-клеток в периферической крови, а только количеством антигенспецифических Т-лимфоцитов, непосредственно участвующих в том или ином иммунологическом процессе. Кроме того, снижение числа CD4+ или CD8+ Т-клеток в крови может объясняться концентрацией их в очагах реакции. Количественное соотношение основных субпопуляций лимфоцитов также может не отражать их реального участия в иммунологических процессах из-за возможности различного функционального состояния этих клеток, в частности, их рецепторного аппарата.
В определенных ситуациях у отдельных больных может оказаться необходимым изучение системы комплемента, определение продукции и рецепции цитокинов, в том числе интерферонов, а также изучение состояния таких факторов неспецифической защиты, как лизоцим и другие. Следует, однако, помнить, что интерпретация полученных данных может оказаться сложной и неоднозначной.
В свете современных представлений о структуре иммунной системы среди методов оценки состояния иммунитета можно выделить методы оценки состояния врожденного иммунитета и методы оценки состояния адаптивного иммунитета.
Для оценки состояния врожденного иммунитета чаще всего применяют качественные методы оценки, позволяющие рассмотреть функциональные характеристики компонентов врожденного иммунитета. В оценке состояния адаптивного иммунитета применимы и качественные, и количественные методы оценки, но на первом, ориентировочном этапе все же более значимыми являются количественные методы оценки, которые дают возможность путем анализа соотношений различных популяций и субпопуляций клеток выявить наличие нарушений в основных звеньях иммунной системы. А далее с помощью тестов, оценивающих функциональную активность клеток, станет возможным более детальный анализ природы выявленных на первом этапе отклонений.
Примеры тестов для оценки состояния врожденного и адаптивного иммунитета приведены в табл. 26.
Первичное иммунологическое обследование, как правило, включает определение минимального количества основных показателей, дающих возможность выявления иммунной недостаточности в широкой клинической практике. В перечне этих показателей на первом месте стоит оценка лейкоцитарной формулы крови (табл.25).
Таблица 25. Нормальные показатели лейкоцитарной формулы
| Всего лейкоцитов | Число гранулоцитов | Число мононуклеаров | |||
| нейтрофилов | базофилов | эозинофилов | лимфоцитов | моноцитов | |
| 4-9х109/л | 52-72% | 0-1% | 1-4% | 20-39% | 3-8% |
Для количественной оценки основных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов на практике все еще применяются наиболее доступные методы розеткообразования.
Дата добавления: 2014-11-29; Просмотров: 3166; Нарушение авторских прав?
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Рекомендуемые страницы:
Читайте также:
. Иммунный статус. Влияние климато-географических,
социальных, экологических и медицинских факторов. Оценка иммунного статуса,
определение состояния гуморального и клеточного иммунитета. Основные показатели
и методы их определения.
Состояние функциональной активности иммунной системы
человека в целом имеет жизненно важное значение для организма и обозначается
понятием «иммунный статус».
Иммунный
статус это количественная и
качественная характеристика состояния функциональной активности органов
иммунной системы и некоторых неспецифических механизмов про-тивомикробной
защиты.
Влияние
факторов
Среди
климато-географических факторов на иммунный статус оказывают влияние
температура,влажность, солнечная радиация, длина светового дня и т.д.Например:
фагоцитарная активность и кожные аллергические пробы менее выражены у жителей
северных районов, чем у южан.Вирус Эпштейна Барр у людей белой расы вызывает
инфекционное заболевание-мононуклеоз а у лиц негроидной расы онкопатологию и
т.д.Жители Африки менее подвержены заб дифтерии чем европейское население.
К
социальным факторам относятся питание, жилищно-бытовые условия,
профессиональные вредности и т.д. Важное значение имеет сбалансированное и
рациональное питание.
Экологические
факторы:загрязнение окружающей среды радиоактивными веществами, широкое
применение пестицидов в сельском хозяйстве, выбросами химических предприятий и
автотранспорта.
Медицинские
факторы: диагностические и лечебные медицинские манипуляции лекарственные
средства стресс.например рентгенография, травмы,операции,антибиотики. Стресс
приводит к нарушениям в работе Т-системы иммунитета действуя в первую очередь
через ЦНС.
Оценка
иммунного статуса
Можно
определить путем постановки комплекса лабороторных тестов включающих оценку
состояния факторов неспецифической резистентности гуморального(В-система) и
клеточного(Т-система)иммунитета.Оценка иммунного статуса проводится в клинике
при трансплантации органов и тканей аутоиммунных заболеваний аллергиях для
выявления иммунологической недостаточности при различных заболеваниях для
контроля эффективности лечения болезней связанных с нарушениями иммунной
системы.В зависимости от возможностей лаборотории оценка иммунного статуса чаще
всего базируется на определении комплекса следующих показателей:1.общего
клинического обследования2.состояния факторов естественной
резистентности3.гуморального иммунитета4.клеточного иммунитета5.дополнительных
тестов.При общем клиническом обследовании учитывают жалобы пациента
анамнез клинические симптомы результаты общего анализа крови,данные
биохимического исследования(спрашивают у пациента наличие профессиональных
вредностей,аллергии,инфекции, перенесенные в детстве заболевания,о
травмах,операциях,о лекарственных препаратах которые принимает,при осмотре
обращают внимание на чистоту кожных покровов и слизистых,при пальпации и
перкуссии уделяют внимание тимусу лимфатич узлам селезенке,обследуют анализ
крови о состоянии иммунокомпетентных клеток(лимфоциты,фагоциты). При
оценке состояния факторов резистентности определяют фагоцитоз компемент
интерфероновый статус колонизационную резистентность. Функциональную активность
фагоцитов определяют по их подвижности, адгезии,поглощению,расщеплению
захваченный частиц, образованию активных форм кислорода. С этой целью
используют такие тесты как определение фагоцитарного индекса,НСТ-тест и
др.Состояние системы комплемента определяют в реакции гемолиза. Интерфероновый
статус выявляют путем трирования на культуре клеток уровня интерферона в
сыворотке крови. Колонизационную резистентность определяют по степени дисбиоза
различных биотопов организма(чаще толстой кишки)
Гуморальный иммунитетопределяют по уровню иммуноглобулинов классов G,M,A.D,E в сыворотке крови количеству специфических антител,
катаболизму иммуноглобулинов, ГНТ, показателю В-лимфоцитов в переферической
крови и т.д. Для определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови
обычно используют иммунодиффузию по Манчини.Титр специфических антител
определяют в различных иммунологических реакциях(агглютинация, РПГА, ИФА и др.)
Число В-лимфоцитов устанавливают путем определения специфических рецепторов на
клетках с помощ моноклональных антител. фУнкциональное состояние В-лимфоцитов
определяют в реакции бласттрансформации путем стимуляции клеток митогенами,
например туберкулин и др. При оптимальных условиях культивирования В-лимф с
митогенами показатель трансформации в бласты может достигать 80%.Подсчет
бластов производят под микроскопом . Состояние клеточного иммунитетаоценивают по количеству Т-лимфоцитов а
также субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови, бласттрансформации
Т-лимф под действием Т-клеточных митогенов, определению гормонов тимуса, уровню
цитокинов, а также кожные пробы с аллергенами. Для постановки кожных
аллергических проб с используются антигены, к которым в норме должна быть
сенсибилизация, например проба Манту с туберкулином. Для определения числа
Т-лимфоцитов в периферической крови используют реакцию розеткообразования Е-РОК
поскольку эритроциты барана образуют с Т-лимфоцитами спонтанные розетки.
Бласттрансформацию Т-лимфоцитов определяют путем стимуляции Т-клеточными
митогенами. Для оценки состояния функции тимуса чаще всего применяют
определение уровня α1-тимозина и тимулина. В качестве дополнительных тестов для
оценки иммунного статуса можно использовать такие тесты как определение
бактерицидности сыворотки крови, титрование С3, С4 компонентов комплемента,
определение содержания С-реактивного белка в сыворотке крови. Все тесты
разделены на две группы: Тесты 1-го уровня могут быть выполнены в любой
клинической иммунологической лаборотории первичного звена здравоохранения, они
используются для первичного выявления лиц с явно выраженной иммунопатологией.
Они вкяючают в себя определение:
‘
общего и относительного числа лимфоцитов;
—основных субпопуляций (Т- и В-клетки);
—фагоцитарной активности лейкоцитов;
—концентрации иммуноглобулинов разных классов в
сыворотке крови.
Общее
(абсолютное) и относительное число лимфоцитов определяют по данным клинического
анализа крови. Содержание Т- и B-лимфоцитов подсчитывают в реакции
иммунофлюорес-ценции, используя меченые моноклональные флюоресцирующие
сыворотки к специфическим поверхностиым антигенным маркерам,
обозначаемым
символами CD(clasterdifferentiation). Таких
антигенных маркеров известно несколько десятков, но отдельные из них
характерны для того или иного типа клеток:
•
рецептор CD3 — всех ‘Г-лимфоцитов;
•
рецепторы CD 19, 20. 21, 72 — В-лимфоцитов;
•
рецепторы CD4 — Т-хелперы;
•
рецепторы CD8 — Т-супрессоры;
•
рецепторы CD 16 — NK-клетки
(натуральные киллеры).
Для более точной диагностики используются
тесты 2-го уровня позволяют провести более глубокий анализ состояния иммунной
системы и уточнить характер дефектов, выявленных с помощью тестов 1-го уровня.
К ним относятся, например, определение отдельных субклассов иммуноглобулинов
(особенно IgG, секреторного IgA) и B-лимфоцитов, регу-ляторных и эффекторных клеток.
Кроме того,
с помощью иммуноферментных и радиоиммунных методов можно определить
концентрации отдельных цитоки-нов главных регуляторных молекул,
определяющих тип иммунного ответа.
Иммунный статус (ИС) – совокупность количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в данный момент времени. Это понятие введено для объективной оценки состояния иммунной системы человека. Изучение показателей иммунитета при иммунных нарушениях должно включать исследования количества и функциональной активности основных компонентов иммунной системы. Все нарушения функции иммунной системы классифицируют, исходя из проявлений различных заболеваний. Выделяют первичные и вторичные иммунодефициты, аутоиммунные, аллергические и лимфопролиферативные заболевания.
Для оценки функционирования всех компонентов иммунной системы, Т и В системы иммунитета, фагоцитарной и системы комплемента, должны быть включены количественные и функциональные методы. Для оценки гуморального звена иммунитета выполняют следующие исследования: определение продукции иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови; определение относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов и их субпопуляций, компонентов комплемента и циркулирующих иммунных комплексов, функциональные тесты (реакция бласттрансформации с митогенами), определение специфических антител, кожные пробы.
Для оценки Т-клеточного звена проводят исследования с определением относительного и абсолютного количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций (Т-хелперов, ЦТЛ), натуральных киллеров, их активационных маркеров, функциональные тесты (реакция бласт-трансформации с митогенами), определение продукции цитокинов.
Состояния фагоцитарной системы оценивают по многим тестам: адгезивная способность нейтрофилов по прилипанию к волокнам нейлона; миграция, хемотаксис в реакции торможения миграции нейтрофилов; метаболическая активность и образование активных форм кислорода по восстановлению нитросинего тетразолия; фагоцитарная активность нейтрофилов в тестах спонтанного и стимулированного микробными полисахаридами фагоцитоза; иммунофенотипирование нейтрофилов.
Ранее эти методы были разделены на тесты 1-го и 2-го уровня. Тесты 1-го уровня являются ориентировочными и направлены на выявление грубых дефектов в иммунной системе. Тесты 2-го уровня направлены на идентификацию конкретной “поломки” в иммунной системе.
Тесты 1-го уровня
- определение относительного и абсолютного количества лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов и тромбоцитов периферической крови;
- определение функциональной активности нейтрофилов (НСТ тест);
- тесты иммунофенотипирования для определения относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов, натуральных киллеров;
- определение концентрации иммуноглобулинов основных классов (IgA, IgM, IgG, IgE);
- определение гемолитической активности комплемента.
С помощью минимального набора тестов можно диагностировать первичные иммунодефициты: хроническую грануломатозную болезнь, Х-сцепленную агамма-глобулинемию, гипер–IgM–синдром, селективный дефицит IgA, синдром Вискотта-Олдрича, тяжелый комбинированный иммунодефицит.
Тесты 2-го уровня
- тесты иммунофенотипирования для определения относительного и абсолютного количества популяций и субпопуляций Т-, В-, NK-лимфоцитов;
- активационные маркеры лимфоцитов;
- оценка различных этапов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитарных клеток;
- определение основных классов и подклассов иммуноглобулинов;
- циркулирующие иммунные комплексы;
- определение концентрации компонентов комплемента в сыворотке крови (С3, С4, С5, С1-ингибитор);
- функциональная активность различных субпопуляций лимфоцитов;
- оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов;
- исследование интерферонового статуса;
- кожные пробы и т.д.
Набор полученных показателей при иммунологическом обследовании называется иммунограммой.
Следует особо подчеркнуть, что полноценный анализ иммунограммы возможен только в комплексе с клиническим состоянием и анамнезом пациента. Отсутствие характерных сдвигов в иммунограмме при выраженных клинических симптомах следует считать атипичной реакцией иммунной системы, что является отягощающим признаком заболевания. Полученные данные пациента сравниваются со средними значениями для данного аналита, полученными в регионе проживания пациента. Среднестатистические показатели различаются в зависимости от региона и подчиняются климатогеографическим условиям, экологической обстановке, условиям жизни. Необходимо также учитывать возраст пациента и циркадные ритмы.
Исследование показателей ИС имеет большое значение для диагностики и дифференциальной диагностики, особенно при первичных иммунодефицитах и лимфопролиферативных заболеваниях, для оценки тяжести, активности, длительности течения и прогноза различный заболеваний, оценки эффективности проводимого лечения.