Практическое применение реакции иммунитета
Реакции иммунитета — это реакции между антигеном и антителом или между антигеном и сенсибилизированными лимфоцитами, которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены invitro. В силу высокой чувствительности и строгой специфичности они нашли широкое применение при диагностике инфекционных болезней.
Реакции антигена с антителом называются серологическими (от лат. serum— сыворотка) или гуморальными (от лат. humor — жидкость). Реакции антигена с сенсибилизированными лимфоцитами называются клеточными.
Серологические реакции — реакции взаимодействия антигена с антителом протекают в две фазы: первая фаза — специфическая, характеризуется соединением детерминантной группы антигена с активным центром антитела (видимого изменения в этой фазе не происходит; вторая фаза — неспецифическая. В этой фазе образовавшийся комплекс антиген — антитело утрачивает растворимость в изотоническом растворе и выпадает в осадок, а может быть видимым визуально. При взаимодействии антител с низкодисперсными антигенами (бактерии, эритроциты) наблюдается феномен агглютинации; при взаимодействии антител с высокодисперсными антигенами (полисахаридами, белками и их комплексами) образуются преципитаты (флокуляты).
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ
В реакции агглютинации (РА) участвуют антитела (агглютинины), содержащиеся в сыворотке крови больного организма, антиген (агглютиноген) — клетки живых или убитых бактерий, возбудителей данной болезни, а неспецифическая фаза осуществляется в присутствии электролита (0,85 %-ного раствора хлорида натрия). Сущность реакции заключается во взаимодействии антитела с антигеном, в результате чего происходит вклеивание микробов с образованием хлопьев, комков, видимых невооруженных глазом. РА характеризуется высокой специфичностью и используется с 1 двоякой целью: а) для диагностики инфекционной болезни путем обнаружения в сыворотке крови больного животного антител к определенному – известному виду микроба (антигену); б) определения вида (типа) выпиленного микроба при помощи заведомо известных агглютинирующих сывороток, содержащих видо- и типоспецифические антитела (агглютинины).
Существует несколько методов постановки РА: пробирочный (объемный), капельный (пластинчатый), кровекапельный, кольцевая реакция с молоком, антиглобулиновый тест (реакция) Кумбса, реакция гемагглютинации и др. В ветеринарной практике РА применяется для диагностики бруцеллеза, сальмонеллеза, колибактериоза, лептоспироза, листериоза и многих других болезней, а также для идентификации выделенных возбудителей.
В последние годы широко применяют реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). По своей высокой чувствительности и специфичности РНГА заняла одно из ведущих мест в серодиагностике. Сущность ее заключается в том, что белковые молекулы антигена соответствующего возбудителя предварительно адсорбируют на обработанных танином эритроцитах барана. Затем ставят реакцию путем смешения сенсибилизированных эритроцитов с сывороткой крови больных животных. При наличии в сыворотке специфических антител на данный антиген происходит агглютинация эритроцитов — реакция положительна. РНГА ставят при диагностике микоплазмоза, сальмонеллезов, вирусных инфекций.
РЕАКЦИЯ КУМБСА
Реакция Кумбса (РК, антиглобулиновый метод) позволяет выявить неполные антитела (агглютиноиды, блокирующие). Неполные антитела одновалентны, в связи с чем они тормозят образование агглютината в РА. Кумбс (1945) предложил эффективный метод выявления неполных антител. Метод основан на применении алтиглобулиновой сыворотки, служащей посредником для соединения неполных антител, фиксированных на корпускулярных антигенах (эритроциты, бактерии). Антиглобулиновую сыворотку получают иммунизацией кроликов сывороткой крови или глобулиновой фракцией животного того вида, у которого исследуют наличие неполных антител.
Имеется два варианта постановки реакции Кумбса: прямой и непрямой. Прямой метод заключается в том, что берут эритроциты исследуемого больного (иммунизированного) животного, которые
на поверхности содержат адсорбированные неполные антитела. При добавлении антиглобулиновой сыворотки к таким эритроцитам invitro происходит их агглютинация. Непрямой вариант реакции Кумбса основан на исследовании сыворотки крови больного животного, содержащей неполные антитела. Сыворотку смешивают с эритроцитами здорового животного для адсорбции ими неполных антител. Затем к эритроцитам добавляют антиглобулиновую сыворотку, которая вступает в реакцию с неполными антителами, в результате происходит агглютинация эритроцитов.
РК используют для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота в бактериальном варианте, т. е. вместо эритроцитов используют бактерии бруцелл.
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ
Для постановки реакции преципитации (РП) используют высокодисперсный антиген в виде прозрачного или слегка опалесцирующего раствора. При соединении антигена (преципитиногена) с антителом (преципитином) в присутствии электролита (0,85 %-ного раствора NaCl) происходит взаимодействие с образованием видимых агрегатов (помутнение, хлопья) частиц, которые постепенно осаждаются на дно пробирки. Осадок получил название «преципитат». РП протекает в две фазы. В первой происходит соединение антигена с антителом, во второй — коагуляция (преципитация) специфического комплекса антиген — антитело в растворе электролита с образованием видимых частиц (серо-белые хлопья, помутнение). Поиск антигена в исследуемом материале проводят с заведомо известной преципитирующей сывороткой.
РП высокоспецифична и чувствительна, позволяет обнаружить антиген в разведении до 1:10 млн. Применяется для исследования кожевенного сырья на сибирскую язву, идентификации некоторых вирусов, бактерий, при установлении фальсификации мяса и др.
Антиген для реакции получают путем экстракции из микробных культур, тканей и органов павших животных, а также из кожевенного сырья. Антитела получают путем гипериммунизации животных антигенами.
Существуют различные методы постановки РП. В ветеринарной практике чаще всего применяют реакцию кольцепреципитации и диффузионной преципитации в агаровом геле.
Реакция кольцепреципитации (реакция Асколи) применяется для обнаружения сибиреязвенного антигена в животном сырье (кожи, кусочки внутренних органов, мышцы). Антиген получают путем экстрагирования в физрастворе горячим или холодным способом. Полученный антиген наслаивают тонкой стеклянной пипеткой на преципитирующую сыворотку, либо сыворотку подслаивают под антиген в узких пробирках. При положительном результате через несколько минут на границе соприкосновения антигена и антитела появляется преципитат, напоминающий серо-белое кольцо или диск.
Реакция диффузионной преципитации в геле (РДП). Эта реакция считается наиболее чувствительной и эффективной при иммунологических исследованиях. В отличие от жидкой среды, где образуется одна линия (полоска) преципитации, в условиях геля.
I реагенты (антигены и антитела) диффундируют навстречу друг другу и на границе соприкосновения (встречи) образуются белые линии преципитата. Существует несколько методов постановки РП.
Метод прямой одномерной диффузии РДП заключается в том, что на столбик или пластинку агара, содержащего специфическую преципитирующую сыворотку, наслаивают антиген в физрастворе, который медленно диффундирует в агар. В результате взаимодействия образуются полоски преципитата, соответствующие реагирующим антигену — антителу.
Метод двойной (встречной) двухмерной диффузии, предложенный Оухтерлони. Реакцию ставят в чашках Петри или на предметных стеклах, залитых 1 %-нымнейтральным агаром. В застывшем агаре с помощью пробойника вырезают по трафаретке луночки размером 0,6 мм.
Обычно в центральную лунку вносят специфическую сыворотку, в окружающие лунки испытуемые (экстракты) и контрольные антигены. Оба компонента диффундируют во встречном направлении в слое агарового геля. На месте встречи специфических антигена и антитела образуется преципитат серо-белого цвета в виде полосок, линий. При ‘исследовании набора антител в исследуемых сыворотках в центральную лунку вносят известный антиген, а в окружающие — соответствующие сыворотки.
В 1953 г. Окли и Фултроп предложили сравнительно простой метод постановки РДП, заключающийся в том, что каждый реагент (антиген и антитело) смешивают с агаром отдельно и поочередно вносят в пробирку. На границе слоев в пробирке при положительном результате образуется полоска преципитата.
Радиальнаяиммунодиффузия (РИД). На поверхность стекла или пластика наливают расплавленный агар, предварительно смешанный с высокоактивной антисывороткой. В застывшем агаре делают лунку (обычно до 2 мм в диаметре) и заполняют ее точным количеством испытуемого антигена. Опыт проводят во влажной камере при постоянной температуре. Антиген диффундирует из лунок радиально в агаровый гель, смешанный с антителами, в результате образуются кольца преципитации. Диаметр этих колец прямо пропорционален концентрации антигена.
РИД используют для определения содержания растворимых антигенов, иммуноглобулинов всех классов, а также различных токсинов и ферментов.
РЕАКЦИЯ ФЛОКУЛЯЦИИ
Реакцию флокуляции открыл Рамон в 1922 г. Он установил, что при смешивании антидифтерийной сыворотки и токсина (или анатоксина) в пробирке, где произошла нейтрализация токсина, появляется помутнение, затем образуются хлопья, которые оседают на дно. Этот феномен получил название реакции флокуляции. Методика опыта заключается в следующем. В ряд пробирок с постоянной дозой токсина (например, 1 мл) вносят нарастающее количество антитоксической сыворотки. Опыт ведут при 37 °С. В отдельных пробирках через некоторое время образуется опалесценция или мелкие хлопья, постепенно выпадающие в осадок при просветлении жидкости. Смесь, в которой раньше всего появилась флокуляция, соответствует нейтральной Смеси, т. е. нейтрализации всего количества взятого токсина (инициальная флокуляция). Следовательно, если известна сила токсина, которая может быть установлена с помощью сыворотки с определенным содержанием антитоксических единиц, то можно выяснить количество антитоксина и в неизвестной испытуемой сыворотке.
Количество анатоксина (например, столбнячного), дающее в смеси с 1 АЕ сыворотки инициальную флокуляцию, называют одной иммуногенной единицей (1 ИЕ). Сила (титр) антитоксической сыворотки характеризуется условно принятой антитоксической единицей (АЕ). АЕ противостолбнячной сыворотки считается наименьшее количество, нейтрализующее 1000 DLM столбнячного токсина.
Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным реакциям, т.к. в ней участвует комплемент и две специфические системы антиген-антитело. Первая система стоит из антигена и антитела, вторая (индикаторная) – из эритроцитов барана и соответствующей им гемолитической сыворотки. Гемолитическая сыворотка, реагируя с эритроцитами, делает их чувствительными (сенсибилизирует) к действию комплемента, в присутствии которого эритроциты разрушаются (лизируются).
РСК протекает в две фазы. В первой (специфической) взаимодействуют антиген, антитело и комплемент. Если антиген соответствует антителу, они соединяются и образуют комплекс, который связывает комплемент. Образовавшийся комплекс визуально не определяется и выявляется индикаторной гемолитической системой, участвующей во второй (индикаторной) фазе реакции. Если после добавления индикаторной системы гемолиза эритроцитов не наступает, комплемент связан первой системой и, следовательно, антиген в ней соответствует антителу. Поэтому отсутствие гемолиза оценивается как положительный результат РСК (рис. 38, см. приложение). Если в испытуемой системе антиген не соответствует антителу, иммунный комплекс не образуется и комплемент остается свободным, вызывая гемолиз эритроцитов. Таким образом, наличие гемолиза свидетельствует об отрицательном результате РСК.
РСК, обладая высокой чувствительностью и специфичностью, нашла широкое применение в серодиагностике ряда инфекционных болезней и идентификации антигенов. Реакция применяется при диагностике сифилиса, других спирохетозов, риккетсиозов, вирусных и других инфекций.
Реакция нейтрализации используется при определении активности микробных (или другого происхождения) экзотоксинов. Реакция основана на способности антитоксической сыворотки нейтрализовать действие токсина. Существуют 2 варианта постановки реакции: in vivo и in vitro.
Первый вариант заключается в том, что готовят последовательные разведения антитоксической сыворотки, затем к каждому разведению добавляют определенную дозу токсина, смесь выдерживают 2 часа при температуре 370 С, после чего вводят чувствительным животным. При нейтрализации токсина антитоксином животные не погибают.
Второй вариант реакции основан на феномене нейтрализации действия микробного токсина (например, гемолитического — 0-стрептолизина патогенного стрептококка) антитоксическими антителами иммунной сыворотки в пробирке. Отсутствие гемолиза свидетельствует о наличии антитоксических антител.
Другим вариантом реакции нейтрализации in vitro является флоккуляция, при которой при взаимодействии токсина или анатоксина с антитоксической сывороткой выпадают хлопья флоккулята. Наиболее интенсивная и ранняя (инициальная) флоккуляция происходит в пробирке, где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях. Флоккуляция является специфической реакцией и ее используют в сывороточном производстве для определения степени активности или установления силы действия антитоксических сывороток.
Реакцию преципитации обычно применяют для определения антигена при диагностике ряда инфекционных болезней (сибирской язвы, менингококковой и пневмококковой инфекций). В судебно-медицинской практике ее используют для определения видовой принадлежности крови и т. д.; при проведении санитарно-гигиенических исследований для установления фальсификации продуктов. Эта реакция служит также для определения филогенетического родства животных, растений и микроорганизмов. В качестве антигена используют полноценные белковые антигены, а также гаптены (полисахаридные, липополисахаридные, гликопротеидные) микроорганизмов или высших организмов. Иммунную преципитирующую сыворотку, содержащую антитела, применяют неразведенной или в небольшом разведении (1:5-1:10). Основными методами реакции являются кольцепреципитация и реакция преципитации в геле.
Реакцию кольцепреципитации ставят в специальных преципитационных пробирках (диаметр 0,4-0,5 см, высота 7—8 см). В пробирку вносят 0,2 мл иммунной сыворотки, на которую осторожно наслаивают такой же объем антигена. Параллельно в том же объеме ставят контроли с заведомо положительной и отрицательной сыворотками, контроль антигена (антиген в изотоническом растворе хлорида натрия), контроль сыворотки (исследуемая сыворотка в изотоническом растворе хлорида натрия). Реакцию учитывают после 5-30 минутной инкубации в термостате при 370С. Положительный результат характеризуется появлением белого кольца (преципитата) на границе антигена и антитела.
Реакция диффузной преципитации в геле (агаровом, крахмальном, полиакриламидном) по Оухтерлони позволяет четко разграничить преципитаты, образованные различными системами антиген-антитело, в разных участках геля, а также детально изучать состав сложных водорастворимых антигенных комплексов. В слое застывшего агара пробиваются лунки. В одну лунку помещают жидкость, содержащую исследуемый антиген, в другую – стандартную иммунную сыворотку. Компоненты, входящие в состав антигена, диффундируют навстречу соответствующему антителу с различной скоростью. Комплекс антиген – антитело расположен в различных участках геля, где образуются линии преципитации. Каждая из линий соответствует только одному комплексу антиген – антитело. Метод широко используется для определения токсигенности дифтерийных бактерий, определения иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови человека и т.д.
Реакция радиальной иммунодиффузия по Манчини также основана на реакции преципитации. При соотношении антигена и антитела, близком к оптимальному, образуется кольцо преципитации. Чем выше концентрация внесенного в лунку антигена, тем больше диаметр кольца. Чем выше концентрация антигена, тем на большее расстояние он продиффундирует до того, как сформируется кольцо, и тем шире будет диаметр этого кольца. Если в реакции использовать 3 стандарта с известной концентрацией антигена, то можно получить калибровочную кривую. Такой подход можно использовать для определения концентрации иммуноглобулинов, компонента комплемента С и т.д.
Иммуноэлектрофорез основан на принципе сочетания электрофореза и реакции преципитации в геле. С помощью этого метода анализируют различные антигены микробов и вирусов, антитела, сыворотку крови человека, ликвор и т.д. Исследуемый материал вносят в лунку, расположенную в геле на стеклянной пластине и разделяют его фракции электрофорезом. Затем в траншею, вырезанную в геле параллельно линии электрофоретической миграции белков, вносят сыворотки против антигенов, которые хотят обнаружить (например, против антигенов менингококка). Антитела сыворотки диффундируют в агар и в местах встречи с соответствующими антигенами образуют зоны преципитации в виде дуги.
Определение неполных антител (реакция Кумбса).Эта реакция позволяет выявить неполные (одновалентные) антитела, которые при соединении с эритроцитами, бактериями и риккетсиями не дают видимых эффектов реакции антиген-антитело, появляясь в крови больных в более ранние сроки и в более высоких титрах, чем полные. Прибавление кроличьей сыворотки против глобулинов человека приводит к агглютинации, т.к. антитела этой сыворотки бивалентны и взаимодействуют с неполными антителами, связанными с поверхностными антигенами бактерий или эритроцитов, с образованием видимого осадка в виде зонтика.
Иммунодиагностика инфекционных заболеваний
Становление иммунологических методов распознавания инфекционных заболеваний пришлось на конец ХIХ-начало XX в. Поскольку взаимодействия иммунной системы и Аг изучали с применением AT сыворотки крови, эти методы получили назвали серологические реакции. Основная идея этих методов — установить феномен ответа организма на чужеродный Аг. Выявление AT к инфекционному агенту даёт возможность не только выявить выраженную текущую инфекцию, но и установить факт первичного инфицирования. Серологические реакции активно применяют при проведении полного объёма диагностических исследований. Увеличение титров AT — зачастую единственный дифференциально-диагностический признак, указывающий на инфекционное заболевание. Выявление AT особенно актуально при неудачных попытках выделить возбудитель инфекции. Однако классические реакции выявления микробных Аг и AT к ним в значительной степени потеряли своё значение в экспресс-диагностике бактериальных инфекций. С одной стороны, такие реакции чувствительны к значимым титрам AT, появляющимся к концу первой недели болезни, что не позволяет поставить диагноз на начальных этапах развития патологического процесса. С другой стороны — при выявлении микробных Аг в серологических реакциях с помощью коммерческих AT необходимо адекватное количество Аг. Избыток или недостаток Аг блокирует достаточное для прочтения реакции образование иммунных комплексов. Проявление этого — «зоны задержки» (феномен прозоны) — отсутствие агглютинации или преципитации при малых или больших разведениях сыворотки крови (рис. 10-13). Тем не менее серологические реакции остаются важным инструментом диагностики заболеваний и идентификации возбудителей. Современный арсенал методов лабораторного распознавания возбудителей составляют десятки иммунодиагностических тестов. Их объединяет общее свойство — все тесты сравнительно редко дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Серологические реакции применяют для двух целей:
1. По известному АГ определяют в исследуемой сыворотке титр специфических к данному АГ антител. Титром сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое еще дает положительную реакцию с соответствующим АГ.
2. С помощью известного АТ, т.е. диагностической иммунной сыворотки, определяют наличие в исследуемом материале специфического антигена или осуществляют серологическую идентификацию выделенной чистой культуры возбудителя.
Все серологические реакции можно разделить на несколько групп:
1. Реакции, протекающие с укрупнением частиц АГ в растворе электролита: реакция агглютинации в ее различных вариантах, реакция преципитации и ее различные
модификации.
2. Реакции, протекающие с участием комплемента: реакция связывания комплемента, иммунного гемолиза и их модификации.
3. Реакции, протекающие с нейтрализацией антигена: реакции нейтрализации токсинов, вирусов, реакции торможения гемагглютинации.
4. Реакции, протекающие с участием фагоцитоза: опсонофагоцитарная реакция и другие.
5. Реакции иммунофлюоресценции в различных вариантах.
6. Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы: ИФА, РИА.
Реакция агглютинации (РА)
Реакция агглютинации (РА) позволяет выявить корпускулярные Аг, точнее Аг, локализованные на поверхности сравнительно крупных частиц (микроорганизмы, клетки различного происхождения). Механизм РА описывает «теория решётки», согласно которой двухвалентное AT взаимодействует одним активным центром с детерминантой одной молекулы Аг, а другим — с детерминантой второй молекулы Аг (рис. 10-13). Рис. 10-13. Схема реакции агглютинации. А — отрицательный результат обусловлен отсутствием AT, специфичных к Аг. Б — положительный результат с образованием аггпютината наблюдают при наличии AT, специфичных к определяемому Аг; визуализация аггпютината возможна при образовании «решётки». В—ложноотрицательный результат возможен при развитии феномена прозоны, когда молекул AT недостаточно для образования «решётки» (1) или имеется избыток AT, также препятствующий её образованию (2). В результате подобного взаимодействия образуется агглютинат. Его формирование невозможно при дефиците или избытке AT. Реакция агглютинации проявляется склеиванием корпускулярных Аг под воздействием AT (агглютининов) и реализуется в изотоническом растворе электролита, например 0,9% раствора NaCl. В реакции агглютинации также можно определять и содержание AT в сыворотке крови больных, например, брюшным тифом (реакция Видаля) или бруцеллёзом (реакция Райта).
Развернутая реакция агглютинации ( РА ).Для определения AT в сыворотке крови больного ставят развёрнутую реакцию агглютинации ( РА ). Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум — взвесь убитых микроорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглютинацию Аг, называют титром сыворотки крови. Разновидности реакции агглютинации ( РА ) для выявления AT — кровяно-капельная проба на туляремию (с нанесением диагностикума на каплю крови и появлением видимых белёсых агглютинатов) и реакция Хаддльсона на бруцеллёз (с нанесением на каплю сыворотки крови диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).
Ориентировочная реакция агглютинации ( РА ) Для идентификации выделенных микроорганизмов ставят ориентировочную РА на предметных стёклах. Для этого к капле стандартной диагностической антисыворотки (в разведении 1:10, 1:20) добавляют культуру возбудителя. При положительном результате ставят развёрнутую реакцию с увеличивающимися разведениями антисыворотки. Реакцию считают положительной, если агглютинацию наблюдают в разведениях, близких к титру диагностической сыворотки. О-Аг. Соматические О-Аг термостабильны и выдерживают кипячение в течение 2 ч. При взаимодействии с AT образуют мелкозернистые агрегаты. Н-Аг. Н-Аг (жгутиковые) термолабильны и быстро разрушаются при 100 °С, а также под действием этанола. В реакциях с Н-антисывороткой через 2 ч инкубации образуют рыхлые крупные хлопья (образованы бактериями, склеившимися жгутиками). Vi-Ar брюшнотифозных бактерий относительно термостабилен (выдерживает температуру 60-62 °С в течение 2 ч); при инкубации с Vi-антисывороткой образуется мелкозернистый агглютинат.
Реакции прямой гемагглютинации Простейшая из подобных реакций — агглютинация эритроцитов, или гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе AB0. Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В-агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые Аг — естественные компоненты эритроцитов. Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглютинация. Многие вирусы способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитающих, их добавление к суспензии эритроцитов вызывает образование агрегатов из них.
117. Реакции иммунитета и их практическое применение при бактериальных инфекциях.
Становление иммунологических методов распознавания инфекционных заболеваний пришлось на конец ХIХ-начало XX в. Поскольку взаимодействия иммунной системы и Аг изучали с применением AT сыворотки крови, эти методы получили назвали серологические реакции. Основная идея этих методов — установить феномен ответа организма на чужеродный Аг. Выявление AT к инфекционному агенту даёт возможность не только выявить выраженную текущую инфекцию, но и установить факт первичного инфицирования. Серологические реакции активно применяют при проведении полного объёма диагностических исследований. Увеличение титров AT — зачастую единственный дифференциально-диагностический признак, указывающий на инфекционное заболевание. Выявление AT особенно актуально при неудачных попытках выделить возбудитель инфекции. Однако классические реакции выявления микробных Аг и AT к ним в значительной степени потеряли своё значение в экспресс-диагностике бактериальных инфекций. С одной стороны, такие реакции чувствительны к значимым титрам AT, появляющимся к концу первой недели болезни, что не позволяет поставить диагноз на начальных этапах развития патологического процесса. С другой стороны — при выявлении микробных Аг в серологических реакциях с помощью коммерческих AT необходимо адекватное количество Аг. Избыток или недостаток Аг блокирует достаточное для прочтения реакции образование иммунных комплексов. Проявление этого — «зоны задержки» (феномен прозоны) — отсутствие агглютинации или преципитации при малых или больших разведениях сыворотки крови (рис. 10-13). Тем не менее серологические реакции остаются важным инструментом диагностики заболеваний и идентификации возбудителей. Современный арсенал методов лабораторного распознавания возбудителей составляют десятки иммунодиагностических тестов. Их объединяет общее свойство — все тесты сравнительно редко дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Серологические реакции применяют для двух целей:
1. По известному АГ определяют в исследуемой сыворотке титр специфических к данному АГ антител. Титром сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое еще дает положительную реакцию с соответствующим АГ.
2. С помощью известного АТ, т.е. диагностической иммунной сыворотки, определяют наличие в исследуемом материале специфического антигена или осуществляют серологическую идентификацию выделенной чистой культуры возбудителя.
Все серологические реакции можно разделить на несколько групп:
1. Реакции, протекающие с укрупнением частиц АГ в растворе электролита: реакция агглютинации в ее различных вариантах, реакция преципитации и ее различные
модификации.
2. Реакции, протекающие с участием комплемента: реакция связывания комплемента, иммунного гемолиза и их модификации.
3. Реакции, протекающие с нейтрализацией антигена: реакции нейтрализации токсинов, вирусов, реакции торможения гемагглютинации.
4. Реакции, протекающие с участием фагоцитоза: опсонофагоцитарная реакция и другие.
5. Реакции иммунофлюоресценции в различных вариантах.
6. Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы: ИФА, РИА.